氟调控成骨细胞OPG/RANKL表达的分子机理

近年来本课题组通过细胞和分子生物学技术对动物地方性氟中毒的发病机理进行研究，发现氟对成骨细胞的毒性呈时间剂量依赖性。硒能保护氟致成骨细胞的毒性作用。本项目的工作主要是：①建立绵羊成骨细胞原代培养模型，应用实时荧光定量PCR法对OPG/RANKL转导信号进行基因克隆、测序和定量表达；②通过电子顺磁共振波谱技术研究成骨细胞中氧自由基作为信号转导分子刺激OPG、RANKL表达，利用流氏细胞技术，研究OPG、RANKL加速细胞因子IGF、TNF、IL-1和IL-6转化，促进成骨细胞增殖和凋亡的特征；③采取免疫组化技术和Western blot分析成骨细胞OPG、RANKL蛋白表达的变化；④添加不同剂量的氟探讨氟对成骨细胞OPG、RANKL基因表达的调控作用和氧自由基介导的氟致成骨细胞增值和凋亡的过程，目的是阐明氟致动物氟骨症时发生骨质硬化、骨质疏松和骨质软化的分子机理，为氟骨症的治疗开辟新的途径。