小型猪拔牙创愈合期破骨、成骨细胞相关OPG、RANKL和RANK的实验研究

Bone resorption that occurs subsequent to tooth extraction is remarkable, and the width and height of the alveolar process significantly reduced. Clinical cases demonstrate that the buccal bone absorbed significantly faster than the palate bone, resulting in the collapse of the buccal alveolar bone， affecting the implant placement and the aesthetic effects. The reason and mechanism of this phenomenon is unclear. The existing literatures mostly observe the healing process of tooth sockets from the histological view， however, do not investigate the sockets resorption and alterations of the each side. By using in situ hybridization, quantitative PCR techniques, this study aims to observe the difference of the quantity and distributing of OPG、RANK and RANKL in precursor osteoblast cell and osteoclast cell, which occurs in minipig tooth sockets and each side of the sockets during the different period after tooth extraction. To find out the bone remodeling characters during the healing process of the sockets. And to discuss the mechanism of the alveolar remodeling subsequent to tooth extraction. To provide theoretical principle to guide the surgeon to choose the suitable time and reasonable intervention of the healing sockets, in order to preserve the alveolar bone volume.

拔牙后缺牙区牙槽突的改建十分活跃，牙槽突宽度和高度明显减小。临床上发现唇颊侧骨板吸收明显快于舌腭侧骨板吸收，导致牙槽骨唇颊侧凹陷，影响种植手术的成功率及修复后的美学效果。出现这一现象的原因和机理目前尚不清楚。现有的文献大多从组织学角度观察拔牙创的愈合过程，而对拔牙窝各壁的吸收改建情况并未做深入的观察和研究。 本研究拟通过原位杂交、定量PCR等技术手段，观察小型猪拔牙创在拔牙即刻至拔牙后90天不同时点拔牙窝内及拔牙窝各骨壁中破骨细胞、成骨细胞前体OPG、RANK及RANKL的数量及分布，了解拔牙窝各壁在拔牙窝愈合过程中的骨改建的过程及特点。初步探讨拔牙后牙槽突骨改建的机制，为指导临床选择合适时机、合理干预拔牙创愈合，保存牙槽骨骨量，提供一定理论基础。

在临床中，我们观察到拔牙后患者，尤其是前牙区，骨吸收情况较为严重，导致唇侧凹陷，对前牙区种植成功率及美学效果产生巨大影响，因此本课题旨在通过建立小型猪拔牙创动物模型，观察拔牙后，颊舌侧拔牙创组织学、成骨细胞破骨细胞以及其相关因子OPG/RANK/RANKL变化规律，寻找拔牙后合理的干预时机，保存更多骨量，降低种植手术失败及美学风险。本实验共建立小型猪拔牙创16只，其中4只分别在1周、2周、4周、8周处死，对所得标本制作硬组织磨片，并进行改良甲苯胺、改良亚甲基蓝-酸性品红染色以及钙黄绿素和茜素红荧光双标记法观察，在光镜下观察成骨细胞、破骨细胞在不同时点及位点相关变化。12只分为6组，每组两只，微创拔除双侧下颌第三前磨牙，分别于拔牙后即刻、1周、2周、4周、6周、8周处死获得拔牙创标本，进行HE染色、TRAP/ALP双重染色以及OPG/RANK/RANKL免疫组织化学染色，最终测算得出小型猪拔牙创愈合中不同时点的骨矿化沉积率、成骨细胞破骨细胞计数以及OPG/RANKL阳性染色的平均光密度值，将所得数据通过软件进行方差分析和样本均数比较。通过以上实验方法，可见拔牙创愈合前2周牙槽嵴顶破骨活动最为活跃，4周后逐渐减弱，拔牙窝内的编织骨逐渐生长形成骨桥封闭拔牙窝，同时牙槽嵴外侧的骨壁自拔牙后出现大量骨膜内成骨现象，4周左右牙槽突外侧新生骨小梁内部逐渐成熟改建为板状骨，外部逐渐分化出成熟的破骨细胞，在其表面形成骨吸收陷窝，这种破骨活动一直持续到8周后。颊舌侧牙槽嵴外的成骨细胞和破骨细胞计数以及OPG和RANKL的表达和分布，在部分时间段表现里表现出一定规律，即颊侧拔牙后2周出现明显骨改建加强现象，但随时间变化的趋势尚无统计学意义。拔牙创颊舌侧牙槽嵴的改建情况和愈合时间存在交互效应，随拔牙愈合时间变化，在同一时点的颊舌侧骨改建活动略有不同，但总体趋势具有一致性。本实验的研究结果对重新思考位点保存等早期干预手段的效果、即刻种植的不稳定性与美学风险以及选择最佳的早期种植时机具有重要意义。