MEG3通过p53/MDM2途径对乳腺癌VEGF的调控及机制

VEGF plays a critical role in tumor angiogenesis with the p53/MDM2 as its major upstream regulator. Previous studies showed that MEG3, a long noncoding RNA, inhibited tumor proliferation via p53, and regulated angiogenesis in mouse embryos. But can MEG3 regulate VEGF in breast cancer via p53/MDM2 pathway? Our researches showed that overexpression of MEG3 led to upregulation of p53 and downregulation of VEGF and MDM2 in breast cancer. So we assumed that MEG3 would inhibit breast cancer angiogenesis by regulating VEGF via p53/MDM2 pathway. In our study, we would use luciferase report, ChIP and ubiqutitination assay to investigete the correlation and interaction between MEG3 and VEGF, including the upstream regulatory elements—p53/MDM2. Further we would investigate the regulatory effects of MEG3 on breast cancer angiogenesis. Our research would be the new key point of molecular mechanism on breast cancer angiogenesis and provide a new target for anti-cancer therapy.

VEGF是肿瘤血管生成的重要调控因子，而p53/MDM2则是其重要的上游调节通路。研究表明长非编码RNA MEG3可通过p53抑制肿瘤增殖；同时能影响小鼠胚胎血管生成。在乳腺癌细胞中，MEG3是否可以通过p53/MDM2途径来调控VEGF，参与乳腺癌的血管生成呢？我们的预实验表明乳腺癌中MEG3的表达上升，可上调p53并下调MDM2和VEGF。因此我们提出假设：MEG3通过p53/MDM2途径作用VEGF来调控乳腺癌的血管生成。本项目拟采用荧光素酶报告基因、ChIP、泛素化检测等方法，分析MEG3和p53/MDM2途径以及VEGF的相互关系和作用机制，研究MEG3对肿瘤血管生成的影响。本研究将是肿瘤血管生成分子机制研究的新切入点，为确立MEG3作为抗肿瘤治疗的新靶点提供更充分的科学依据。

研究背景：VEGF是肿瘤血管生成的重要调控因子，而p53/MDM2则是其重要的上游调节通路。研究表明长非 编码RNA MEG3可通过p53抑制肿瘤增殖；同时能影响小鼠胚胎血管生成。在乳腺癌细胞中，ME G3是否可以通过p53/MDM2途径来调控VEGF，参与乳腺癌的血管生成呢？我们的预实验表明乳腺 癌中MEG3的表达上升，可上调p53并下调MDM2和VEGF。因此我们提出假设：MEG3通过p53/MDM2 途径作用VEGF来调控乳腺癌的血管生成。.主要研究内容、重要结果及关键数据：.1）乳腺癌中 MEG3 与 p53、MDM2、VEGF 的表达水平： .（1）我们检测了132个乳腺癌患者的MEG3 与 p53、MDM2、VEGF肿瘤组织及癌旁组织的表打水平，发现MEG3与P53表达成正相关（rs=0.828），与MDM（rs=-0.737）和VEGF（rs=-0.694）成负相关。.（2）我们用原位杂交观察到MEG3在乳腺癌的表达与组织学分级有关，分级越高，MEG3表达越低，提示MEG3是抑癌基因。.（3）生存分析提示高表达MEG3患者的总生存率（OS，72.34月）要高于低表达组（68.62月）。.2) 乳腺癌中 MEG3 与 p53、MDM2、VEGF 的相互作用.(1)我们构建了稳定表达MEG3的病毒载体（pLV.O-MEG3），将该载体感染人乳腺癌细胞株后得到稳转株。发现稳转株细胞里边，p53表达升高、而MDM2和VEGF表达下降。.(2)我们在稳转株中转染siRNA-p53，降低p53的表达，发现siRNA-p53可拮抗MEG3表达升高引起的VEGF下降.3）MEG3 通过 p53/MDM2 促进 VEGF 表达的机制研究：在稳转株中，我们行荧光素酶实验，发现MEG3可促进VEGF的转录以及VEGF的表达和分泌。.4）MEG3 促进 p53 表达的机制研究。我们行荧光素酶实验及泛素化实验，证明MEG3可促进p53的转录，并通过抑制MDM2，稳定p53的蛋白表达。.5）动物实验。我们将稳转株以及表达siRNA-p53的肿瘤细胞接种到NOD-SCID小鼠，发现MEG3表达升高抑制了移植瘤的生长和肝肺等远处转移。.科学意义：.明确 MEG3 在乳腺癌细胞中肿瘤血管生成的作用，完善肿瘤血管生成的分子生物学机制。