PAX6基因调控视网膜母细胞瘤细胞周期特异性化疗药物作用敏感性的研究

化疗已成为视网膜母细胞瘤治疗的重要手段，其药物作用敏感性是影响治疗效果的瓶颈。前期工作（NSFC面上项目，No.30772377）已证实PAX6过量表达促进了RB形成，其发生机制与细胞周期调控有关。是否可调控PAX6表达水平影响RB细胞周期状态，使更多肿瘤细胞进入对细胞周期特异性化疗药物（CCSA）敏感的S期或M期，从而提高治疗敏感性？前期实验证实：抑制PAX6表达后，由MTT法检测发现RB细胞生长抑制率增加。据此我们假设：PAX6的异常表达与RB对CCSA作用敏感性有关，并通过对细胞周期的调控参与了这一过程。本项目拟收集新鲜RB组织，进行原代培养，利用DNA重组技术调控PAX6在RB中的表达水平，检测CCSA作用敏感性和细胞周期，并结合动物实验及分子机制研究，共同验证PAX6对 CCSA作用敏感性的影响及可能调控机制。为今后探索新的RB化疗药物、联合用药方案及治疗模式奠定一定的理论基础。

背景：化疗已成为治疗视网膜母细胞瘤的重要手段，化疗药物作用敏感性是影响治疗效果的瓶颈。前期实验研究证实，抑制PAX6表达后RB细胞增殖抑制率增加，其发生机制与细胞周期调控有关。是否可通过调控PAX6表达水平影响RB细胞周期状态，使更多肿瘤细胞进入对细胞周期特异性化疗药物（CCSA）敏感的S期或M期，从而提高治疗敏感性？.主要研究内容：收集新鲜RB组织，进行原代细胞培养，通过构建慢病毒载体调控PAX6在RB细胞中的表达水平，检测CCSA作用敏感性和细胞周期，并结合动物实验及分子机制研究，验证PAX6对CCSA作用敏感性的影响及其可能调控机制。.重要结果及关键数据：.1. 长春新碱作用于RB细胞的半数抑制浓度为0.02789μg/ml，依托泊苷为0.4647μg/ml。.2. PAX6过表达组（OE）细胞内PAX6 mRNA相对表达量较对照组明显上升，PAX6抑制组(KD)较对照组明显下降（P<0.001）。.3. OE组较其他组细胞增殖速度快，以Y79细胞为著。加入长春新碱后各组细胞增殖速度减慢，以OE组为著（P<0.05）。.4. 加入长春新碱后，Y79细胞OE组、KD组和CON组的细胞凋亡率较前显著增加，以OE组为著（P<0.05）。.5. 加入长春新碱后，OE组G0/G1期细胞比率较前显著上升，S期和G2/M期细胞比率较前显著下降（P<0.05）。.6. PAX6过表达使RB细胞对长春新碱的敏感性增加，其机制可能与PAX6基因促进肿瘤细胞进入细胞增殖期有关。.科学意义：探寻提高现有RB化疗药物作用敏感性的方法，为今后探索新的治疗方案奠定一定的理论基础。