Zeb1基因对视网膜母细胞瘤干细胞的调控作用和机制研究

处于细胞分裂静止期的、具有无限增殖和多向分化潜能的肿瘤干细胞是造成肿瘤转移复发的主要原因，而目前的抗肿瘤治疗主要针对分裂细胞，具有局限性。在长期从事视网膜干细胞研究的基础上，我们采用免疫磁珠法从HXO-RB44和Y79视网膜母细胞瘤细胞系分选ABCG2+的细胞亚群，检测其肿瘤干细胞相关基因的表达、细胞周期和细胞凋亡、自我更新能力、致瘤性，鉴定视网膜母细胞瘤干细胞。以细胞恶性转化、肿瘤浸润转移的中心环节"上皮-间质细胞过渡（EMT）"为切入点，采用微小RNA干扰技术下调EMT转录因子Zeb1基因的表达，分析Zeb1基因对肿瘤干细胞生物特性的影响和可能的调控机制，为寻找能够抑制肿瘤干细胞增殖和促进肿瘤干细胞分化的药物或分子提供线索，对调整肿瘤治疗策略具有重要意义。

本研究探讨了Zeb1基因/miR 200c对视网膜母细胞瘤和脉络膜黑色素瘤细胞的上皮-间质转化及肿瘤干细胞的调控作用，结果如下：（1）视网膜母细胞瘤患者的肿瘤组织中存在上皮/间质转化和肿瘤干细胞：在视网膜母细胞瘤肿瘤组织中检测到上皮细胞特异性蛋白E-cadherin 、间质细胞特异蛋白N-cadherin、肿瘤耐药相关蛋白ABCG2、肿瘤干细胞标记蛋白CD133的表达，而上皮/间质转化（N-cadherin的表达增强）、CD133的表达与肿瘤的转移分化有关，提示其在评估及预测视网膜母细胞瘤的恶性程度与转移的潜在作用。（2）miR 200c对眼内肿瘤细胞的调控作用：在视网膜母细胞瘤细胞株WER1和Y79、以及脉络膜黑色素瘤细胞株OCM1中，存在上皮型和间质型两种表型，miR200c转染可下调ZEB1和N-cadherin 基因的表达，上调上皮细胞特异性基因E-cadherin的表达，抑制肿瘤细胞的间质表型，促进其向上皮细胞转化；这种调控主要发生在翻译后的蛋白水平。（3）miR200c对肿瘤细胞迁移和成瘤性的影响：miR200c转染后，视网膜母细胞瘤和脉络膜黑色素瘤细胞的迁徙能力显著降低；肿瘤干细胞标记基因BMI的表达下调，肿瘤细胞体外成瘤率显著降低；（4）ZEB1对EMT和miR200c的调控：在视网膜母细胞瘤和脉络膜黑色素瘤细胞中，ZEB1与miR200c相互抑制，Zeb1促进眼内肿瘤细胞发生EMT以及干性因子的表达。