长链非编码RNA MEG3调控C-MET在非小细胞肺癌EGFR-TKI耐药中的作用机制研究

EGFR - TKI resistance is a clinical troublesome question, C - MET amplification is a key factor in EGFR - TKI resistance.LncRNA MEG3 plays a positive role in the regulation of cancer development, invasion and metastasis, but there is rarely data in resistance. Our preliminary results show that the expression of LncRNA MEG3 significantly reduced in EGFR-TKI resistance cell line in non-small cell lung cancer. Over expression of MEG3 inhibited the expression of C-MET significantly in EGFR-TKI resistance cell line, and increased the drug sensitivity. What is the mechanism of LncRNA MEG3 regulate EGFR-TKI resistance caused by C-MET amplification and whether pigenetics is involved in the way of regulation have not been elucidated. Therefore, we hypothesized that LncRNA MEG3 / C-MET/PI3K/AKT/P53 pathway plays a important role in EGFR-TKI resistance, and it regulated by epigenetic.We will validate it in lung cancer cell line, tissue samples and animal model, using the qRT PCR, immunohistochemistry, Chip, RNA-pulldown, RNAi, luciferase report system technology. It will be confirmed that LncRNA MEG3 inhibite EGFR-TKI resistance through C-MET in non-small cell lung cancer, and it will further improve the drug resistance mechanism. This study focused on LncRNA MEG3 will provide a new point of view for clinical treatment.

EGFR-TKI耐药是临床急待解决的问题，C-MET扩增是导致耐药的关键因素。LncRNA MEG3在肿瘤发展过程中起重要作用，但在肿瘤耐药中研究甚少。我们预实验结果显示， EGFR-TKI耐药的NSCLC细胞中LncRNA MEG3表达显著降低，过表达MEG3后，显著抑制C-MET的表达,增加药物敏感性。但LncRNA MEG3在C-MET扩增介导的EGFR-TKI耐药中的机制及表观遗传学是否参与该途径的调控均未阐明。因此，提出假设：LncRNA MEG3/C-MET/PI3K/AKT/P53通路参与EGFR-TKI耐药，并受到表观遗传学的调控。本课题拟在细胞、肺癌组织样本、动物模型三个层面，运用qRT-PCR、免疫组化、Chip、RNA-pulldown、RNAi、等技术，证实LncRNA MEG3调控C-MET介导的EGFR-TKI耐药，进一步完善耐药机制,为临床治疗提供理论依据。

表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKI）是治疗EGFR突变非小细胞肺癌患者的一线药物，其有效率为 50%-80%，但这些对EGFR-TKI治疗有反应的患者，最终都因产生耐药导致治疗失败，耐药问题已经成为限制 EGFR-TKI 疗效进一步提高的瓶颈。C-MET基因扩增是EGFR-TKI耐药的原因之一，LncRNA MEG3 在肿瘤发展过程中起重要作用，但在肿瘤耐药中研究甚少。LncRNA MEG3在C-MET扩增介导的EGFR-TKI耐药中的机制及表观遗传学是否参与该途径的调控尚未阐明。临床上迫切需要探讨 EGFR-TKI 耐药机制，为逆转耐药治疗提供新的视角。.首先在细胞水平研究了lncMEG3对非小细胞肺癌耐药的影响，MTT实验及克隆形成实验结果表明过表达MEG3后可以抑制PC9G细胞增殖，增加耐药细胞对吉非替尼的敏感性；干扰MEG3表达后细胞增殖能力增强，降低耐药细胞对吉非替尼的敏感性。动物实验表明，转染pCDNA-MGE3组肿瘤体积及重量明显小于对照组，验证了MEG3可以提高耐药细胞PC9G对吉非替尼药物敏感性。在NSCLC耐药患者耐药前后的标本中检测MEG3及C-MET的表达水平，结果提示耐药后癌组织中MEG3的表达水平明显低于耐药前，并与C-MET的表达水平呈负性相关，提示NSCLC患者的EGFR-TKI 耐药可能与MEG3介导C-MET的表达相关。我们以MEG3的antisense RNA为对照，通过RNA pull down 联合质谱发现MEG3并不是特异性直接绑定HDAC2，而是绑定了其他蛋白，说明本课题组前期通过RNA免疫共沉淀（RIP）发现HDAC2与MEG3之间的绑定并不是二者之间的直接绑定。所以MEG3-HDAC2-C-MET这条通路并不是直接通路，MEG3可能是通过绑定其他蛋白调控C-MET及其他靶基因的表达。本课题组接下来会进一步验证MEG3所直接绑定的蛋白，进而深入说明MEG3与C-MET之间的直接调控关系。. 证实 LncRNA MEG3调控C-MET介导的EGFR-TKI 耐药，进一步完善耐药机制，为临床治疗提供理论依据，以期为临床克服耐药提供新的靶点。