Centlein参与原生纤毛形成和细胞中心体微管组织中心功能的研究

本申请拟（1）阐明centlein结合蛋白KIFC3在细胞中心体的功能，从而明晰定位于细胞母中心粒上的centlein, KIFC3，p150Glued的上下游关系。并首次提出，除已知的dynein/dynactin外，KIFC3/dynactin复合体也参与中心体蛋白的运输。（2）绘制centlein与β-连环蛋白相互作用的功能性结合区域。（3）检测centlein与β-连环蛋白降解途径中不同蛋白的相互关系，以探究RNA干扰沉默centlein明显增强hTERT-RPE1细胞核中的β-连环蛋白免疫荧光染色与原生纤毛形成障碍的关系。（4）采用时差显微技术和活细胞显像分析，明确centlein, KIFC3，p150Glued的相互依赖关系，有可能提出一个微管负端结合蛋白调节细胞间粘附的新模式。上述问题的阐明为进一步研究细胞中心体蛋白的运输，以及β-连环蛋白在原生纤毛形成中的作用奠定了基础。

中心体连接作为一种较为松散的蛋白结构连接着两个母中心粒，保证了中心体微管组织中心功能的发挥。中心体连接的障碍造成中心体分裂。目前报道的参与中心体连接的蛋白数目在不断增加，但对于中心体连接的构成和调控机理很大程度上任然是未知的。在本课题中，我们发现了一种新的中心粒蛋白Centlein，它定位于中心粒的近端，与C-Nap1和Cep68直接相互作用。在细胞间期，Centlein作为连接分子连接C-Nap1和Cep68，在中心粒近端形成复合体，敲低Centlein后影响Cep68中心体招募，造成中心体的分裂。此外，Centlein和Cep68都是Nek2A的底物。总之，我们的研究揭示了中心体连接需要C-Nap1-Centlein-Cep68复合体的维持。