TGF-β1和BMP-7介导的Smads通路在调控大鼠肝纤维化模型肝组织SnoN表达中的交互作用及复方861干预研究

Our previous studies had shown that herbal compound 861 (Cpd861)could up-regulate TGF-β1 to play the role of in treating hepatic fibrosis. It was reported recently that Smad transcriptional co-repressor SnoN acts as an antagonist that tightly controls the trans-activation of TGF-β1/Smad target,and the loss of SnoN is a critical,pathogenic event that may lead to hepatic fibrosis, TGF-β1 signal downregulation the expression,and BMP-7 signal have an opposite role.But,the cross-talk of the two signal in regulation of SnoN expression is remain unknow. In this study, we will use bile duct ligation(BDL) induced liver fibrosis rat model.1.Observation the influence of Cp861 on the protein and mRNA expression of SnoN in liver fibrosis.2.We will detected Cp861 on the expression of the two main signals that regulation SnoN expression TGF-β1/Smad2/Smad3, BMP-7/Smad1/Smad5/Smad8 , and discuss the molecular and mechanism of Cp861 regulation the expression of SnoN.3.By intervening liver fibrosis progression use BMP-7,detecting the expression of TGF-β1/Smad2/Smad3 signal molecules, SnoN pretein and mRNA.Finally,Cp861 will be used to intervention the regulation of BMP-7 on SnoN expression.This study will help to provide more experimental basis for the mechanism of Cpd861 removing blood stasis in treating hepatic fibrosis.

复方861是抗肝纤维化的有效药物，可通过下调TGF-β1发挥抗肝纤维化作用。新近研究显示，核转录抑制因子SnoN是调节纤维化形成的重要因子，其表达异常直接影响肝纤维化进程，而TGF-β1和BMP-7介导的Smads信号能分别下调和上调SnoN表达，但二者交互作用尚不清楚。本项目利用大鼠胆管梗阻肝纤维化模型：1.观察复方861对纤维化肝组织SnoN基因和蛋白表达的影响；2.观察复方861对TGF-β1/Smad2/Smad3和BMP-7/Smad1/Smad5两条信号通路表达变化的影响，探讨其调控SnoN表达分子机制；3.利用BMP-7干预纤维化进程，观察SnoN、TGF-β1信号表达变化，明确两条信号通路调控SnoN表达的交互作用，并观察复方861对BMP-7调控SnoN表达的干预作用。本项目从细胞信号交互作用水平探讨肝纤维化发病机制及复方861干预作用，为中医药治疗纤维化提供实验依据。

肝纤维化是多种慢性肝病向肝硬化进展的必经途径，是肝脏对各种慢性损伤产生的一种修复反应，持续发展则导致不可逆转的肝硬化，甚至肝癌。因此，肝纤维化是临床干预的主要目标，但迄今尚无理想的治疗手段。. SnoN(Ski-related novel protein N)是核转录共抑制因子Ski家族成员，作为一种拮抗因子可严格调控转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1, TGF-β1）/Smad信号的活性，从而保证在正常生理条件下TGF-β1/Smad信号输出的稳定性。TGF-β1是目前公认的促肝纤维化最有效、最有力的细胞因子。作为公认纤维化诱导因子TGF-β1的重要负调控因子，SnoN是否参与了肝纤维化的发生、发展，以及在肝纤维化发生过程中起着怎样的作用，目前国内外尚未见到相关的报道。而这方面的研究使我们从纤维化过程的负调控角度，对肝纤维化进行性发展为肝硬化的机制有新的认识。. 我们在既往对“复方861通过下调TGF-β1发挥抗肝纤维化作用”实验研究基础上， 结合核转录共抑制因子SnoN具有抗肝纤维化作用、TGF-β1和BMP-7是调控SnoN表达的主要信号通路的新进展。认为纤维化肝组织SnoN表达调控中存在TGF-β1/Smad2/Smad3 和BMP-7/Smad1/Smad5/Smad8的交互作用；复方861通过下调TGF-β1/Smad2/Smad3、上调BMP-7/Smad1/Smad5/Smad8、进而上调SnoN表达，发挥其活血化瘀抗肝纤维化作用。. 因此，本实验通过观察SnoN在胆总管结扎肝纤维化大鼠化大鼠肝组织中的表达，研究SnoN在肝纤维化中的表达情况。进一步采用抗肝纤维化的有效药物复方861进行干预，观察复方861对纤维化肝组织SnoN蛋白表达的影响，并从与之降解相关的TGF-β1-Smad2/3和BMP-7-Smad1/5信号途径探讨复方861干预肝纤维化进程的分子机制。结果：复方861可改善肝纤维化病变；复方861能显著提高胆总管结扎诱导纤维化肝组织中SnoN蛋白表达，对SnoN mRNA表达无影响；复方861可显著降低胆总管结扎诱导纤维化肝组织中磷酸化Smad2和Smad3蛋白表达，升高Smad1/5表达。结论：复方861的抗肝纤维化作用可能与其上调SnoN蛋白表达有关。