TLR信号负性调节分子SIGIRR在急性肺损伤中的作用及机制

急性肺损伤（ALI）是胸外科主要术后危重并发症及SARS、H5N1等病毒感染致死的主要原因。其发病机制未完全明了，且现有治疗措施效果不佳。TLR4-MyD88与TLR5信号通路在细菌所致ALI的发病机制中扮演重要角色，同时新近发现TLR4-TRIF通路在病毒所致ALI中具有重要作用。SIGIRR作为TLR信号通路中的负性调控分子，已被证实可抑制TLR4-MyD88信号转导，但其对TLR5及TLR4-TRIF信号通路的调节作用未见报道。我们前期工作发现正常人肺泡上皮细胞表达SIGIRR，并抑制LPS所致NF-kB活性及炎性细胞因子释放。因此我们推测SIGIRR 在ALI中可能具有减轻损伤、保护肺泡上皮细胞的作用。本研究拟观察SIGIRR在TLR5及TLR4-TRIF信号通路中的作用及机制，并通过基因治疗方式观察其对不同ALI模型的治疗作用。以期从固有免疫调控机制方面，为ALI治疗提供新策略。

项目自2011年启动以来，基本上按照申请计划的年度安排进行，截止目前，已经基本完成了申请计划中所规划的实验内容，并在一些方面取得了预期的实验效果，但并没有圆满的完成全部的规划成果，在一些特殊原因的影响下，实验结果目前还没有完全整理完并顺利发表，现将计划书中所规划的实验计划及成果进行总结。.（1）构建了SIGIRR基因重组腺病毒载体。我们利用AdEasyTM系统构建了SIGIRR基因重组腺病毒，并检测了SIGIRR mRNA及蛋白在感染细胞中的表达。通过多次扩增后，制备了足够的高滴度腺病毒。.（2）建立了LPS、鞭毛蛋白及OxPAPC诱导的小鼠ALI模型。我们分别建立了LPS、鞭毛蛋白及OxPAPC诱导的小鼠ALI模型。检测其肺弹性变化，收集支气管肺泡灌洗液并进行细胞计数、细胞因子及趋化因子水平检测，动脉血气分析。取肺组织检测湿/干重比并光镜观察病变情况。通过以上指标评价ALI程度。于不同时间收集肺部组织并进行Western blot 检测，观察了SIGIRR表达与ALI程度之间的相关性。.（3）在细胞层面明确了SIGIRR在HMGB1、Flagellin、OxPAPC诱发ALI中的作用，包括SIGIRR对HMGB1、Flagellin、OxPAPC刺激产生炎症因子的调节作用，以及HMGB1、Flagellin、OxPAPC对SIGIRR表达的负反馈调节作用。.（4）探索了SIGIRR在细胞水平与TLRs的相互作用机制，包括SIGIRR对HMGB1、Flagellin、OxPAPC激活相应TLRs后，SIGIRR与TLR信号通路下游信号分子的结合作用以及核转录因子转录活性的调节。.（5）在活体层面研究了SIGIRR基因重组腺病毒对小鼠ALI的预防及治疗作用。发现SIGIRR基因重组腺病毒对小鼠ALI确实有一定的预防作用，但具体的治疗作用，尚未得到明确的验证。.截止目前，发表了国内源期刊论文4篇，SCI论文3篇，遗憾的是高影响因子SCI论文尚未发表（原因主要是由于实验安排不够紧密，导致实验进度有些拖后，另外由于部分相同的实验研究国内已经进行过研究，并且已经在sci杂志上有过发表，所以对我们实验发表相关论文造成了一定影响，经过改进部分实验，我们希望能发表高影响因子的论文，目前正在进行相关的数据统计和论文撰写工作）。