HR4结合抑制剂模拟肽-CTB疫苗经粘膜免疫途径诱导变应性鼻炎免疫耐受机制的研究

变变应性鼻炎（AR）是致敏原引发的以组胺为代表的多种介质释放为开端的鼻黏膜炎症反应性疾病，组胺受体4(HR4)是新发现的存在于几乎所有造血细胞表面的膜蛋白，具有免疫调节功能。本课题提出利用"高效安全的HR4拮抗剂疫苗为起点的免疫治疗可能成功用于预防和治疗AR"，（1）应用HR4拮抗剂体研究HR4在树突细胞调节T0细胞极化方向的调节功能（2）噬菌体展示技术鉴定筛选HR4表位模拟肽；以表位模拟肽为亲和靶标进行肽库的筛选，获得特异性拮抗HR4的基因序列,完成CTB-HR4拮抗模拟表位肽的耦连，完成疫苗的构建（3）体内体外实验，分别经鼻进行疫苗预防性给药和治疗疫给药，探讨该疫苗的免疫调节机制，评估疫苗预防与治疗疗效，并同时观察对下气道高反应性的影响。从而在多个层面论证我们的设想。本课题期望成功构建HR4拮抗剂模拟肽疫苗，并为其应用于临床提供理论依据

背景：拮抗组胺受体4参与变态反应性炎症的发展过程，但被动免疫因为需要需长期持续给药具有其局限性，模拟表位技术使自体疫苗的制备成为可能，以主动免疫方式来替代或补充单抗被动免疫治疗，克服拮抗剂治疗缺陷。..目的：利用噬菌体随机展示技术筛选出与兔单克隆抗体ab178704（Anti-HRH4 [EPR12867].antibody）特异亲和的HRH4模拟表位，模拟表位肽与CTB及脂质体一起构建模拟表位肽-CTB-脂质体复合物，制备HRH4自体疫苗，并利用变应性鼻炎(AR)动物模型对疫苗的有效性进行验证。..方法： 以ab178704为靶分子，对噬菌体12肽库进行3轮生物淘洗，随机挑取30个克隆，ELISA法鉴定其亲和性，将亲和性高的阳性克隆进行DNA序列测定，推导与噬菌体外壳融合的12肽氨基酸序列..模拟表位肽与CTB及脂质体一起构建模拟表位肽-CTB-脂质体复合物，制备HRH4自体疫苗，并利用变应性鼻炎(AR)动物模型对疫苗的有效性进行验证。..结果： 23个噬菌体克隆与HRH4单抗有较强的亲和性，测序结果显示23个噬菌体阳性单克隆插入的外源多肽序列为2 条不同的序列，我们将这2条序列分别命名为PT1，PT2。化学合成的12肽能与HRH4单抗特异性结合，所述的模拟表位与HRH4的蛋白序列无同源性。PT1疫苗和PT2疫苗治疗及预防组均可以产生特异性抗体并与人HRH4结合。与对照疫苗相比，PT1疫苗和PT2疫苗治疗及预防组IFN -r,IL-2表达水平均上调，IL-6 表达水平下调。..结论： 初步证明12肽模拟了HRH4部分表位，以其为基础的HRH4自体疫苗可以通过增强Th1 介导的细胞免疫，抑制Th2 介导的体液免疫，纠正Th1 /Th2 细胞因子平衡，可能为以HRH4为靶点的治疗性疫苗开发和设计的策略。.