鸡胆汁外源体（exosome）抗禽反转录病毒信号转导机制

Exosome is a membrane vesicles of living cells secreted into the extracellular cells that transfer information between cells. In our previous study, we found that chicken biliary exosome can inhibit avian retrovirus replication. The process of retrovirus hijacking exosome indicate that chicken biliary bile exosome might transduct certain signals of anti-viral proteins which inhibit replication of avian retroviruses. For analysis the signal transduction mechanism, we focus on the chicken biliary exosome, and make clear chicken bile the exosome biological characteristics, and immune activity. We establish cells line and animal models, using avian retroviruses as a model virus to study the chicken biliary exosome effect on retroviral infection and influencing factors; proteomic screening the key proteins with immunomodulatory founction in the biliary exosome; blocking by antibody or RNA interference to study the signaling pathway in these key proteins in the retroviral infection process. At last, we would elucidate the biliary exosome signal transduction mechanism for in the process of retroviral infection, and it may provide a scientific basis for the control of avian retroviruses.

外源体（exosome） 是活细胞分泌到细胞外的一种膜性小囊泡，具有细胞间信息传递功能。我们前期对鸡胆汁exosome生物学特性的的研究中发现，其具有抑制禽白血病病毒（属反转录病毒）复制的作用。结合反转录病毒在复制过程会劫取部分exosome这一特性，我们推测，鸡胆汁exosome可能通过转导细胞内的某些抗病毒信号（蛋白）抑制反转录病毒的复制。为解析其转导机制，我们建立细胞及动物模型，以禽反转录病毒为研究对象，研究正常鸡只、感染鸡只胆汁exosome对反转录病毒感染的作用及影响因素；通过蛋白组学相关方法筛选胆汁exosome中免疫调节作用的关键蛋白；利用RNA干扰技术或抗体阻断研究关键蛋白在反转录病毒感染过程中的信号通路，从而明确胆汁exosome在反转录病毒感染过程中主要的信号转导机制，为抗禽反转录病毒药物的研制提供科学基础。

外源体(Exosomes)是一种来源于活细胞晚期内涵体的具有生物活性的蛋白囊泡，具有细胞间信息传递功能，同时在免疫应答和病毒感染过程中具有重要作用。家禽Exosomes的研究尚属空白。本研究首次提取出鸡胆汁exosomes，鉴定了其蛋白种类，发现了胆汁exosomes对肝脏CD4+T淋巴细胞的增殖作用，明确了胆汁exosomes 的抗ALV-J作用，对于禽白血病的防控具有重要意义。. 选用42至43日龄的白色来航SPF鸡采集新鲜胆汁，经分级离心、过滤后用蔗糖密度梯度离心分离得到胆汁Exosomes，通过超薄切片观察，确证其主要来源于肝细胞及胆管上皮细胞； SDS-PAGE电泳分离，液相串联质谱分析，证明鸡胆汁Exosomes含有重要功能蛋白HSP70，C-反应蛋白，CCCH型锌指抗病毒蛋白，粘蛋白等和大量免疫球蛋白等196种蛋白成分。. 进行了胆汁Exosomes对脾脏、胸腺、肝脏白细胞的免疫作用及抗禽白血病病毒的体外实验。我们设计分离42-43日龄SPF鸡胸腺、脾脏、肝脏白细胞，加入一定剂量的胆汁Exosomes共培养适当时间后，通过流式细胞仪检测CD4+、CD8+、Ia、 MHCⅡ、MHCⅠ、Monocyte抗体水平，结果显示：一定剂量的鸡胆汁Exosomes在适当时间作用下可使肝脏白细胞中的CD4+T细胞显著增殖，同时CD8+ T细胞和单核细胞数量也有所增加，B细胞数量变化不显著。表达MHCⅠ细胞数显著增加，而表达MHCⅡ细胞数变化不显著。对脾脏和胸腺中CD4+、CD8+T细胞和单核细胞作用效果轻微，但可以增加存活率（对CD8+T存活率可提升4.85%）、延长其存活时间。证实鸡胆汁Exosomes具有增强肝脏白细胞免疫反应的能力，这对肝脏局部免疫具有重要意义。同时，胆汁Exosomes具有一定的靶向作用，对来源细胞的作用显著。. 首次在家禽胆汁Exosomes上发现了CCCH型锌指抗病毒蛋白,我们开展了其抗ALV-J病毒的研究工作，研究显示：低剂量（5μg/ml）胆汁Exosomes可以激活淋巴细胞，使淋巴细胞数量上升，提高免疫能力，抵御病毒感染；而随着Exosomes浓度增高，Exosomes促进淋巴细胞增殖的能力减弱，并与单纯病毒感染的效果趋于一致。适宜剂量和用药时间对Exosomes发挥抗病毒作用尤为重要，我们也将在未来的研究中得以明确