幽门螺杆菌Lpp20的H-2d限制性Th表位的鉴定及其免疫学特性的研究

目前对幽门螺杆菌感染的免疫机制研究表明, 机体的CD4+T细胞而非CD8+T细胞对H.pylori 感染的免疫保护作用是十分重要的。Lpp20 是H.pylori入侵宿主后可诱导机体产生保护性免疫反应的重要抗原之一，鉴定其Th表位并研究其特异性的T细胞免疫应答特征具有重要的生物学意义和潜在的应用价值。本课题以BALB/c小鼠为模型,首先采用生物信息学预测Lpp20的H-2d限制性的Th表位，体外固相合成表位肽,然后结合CD4+T淋巴细胞功能实验、MHC限制性分析、ELISA等方法确定其Th表位并分析其免疫学特性。在此基础上，将筛选出的Th表位和已鉴定的一个Lpp20的B细胞表位串联并在E.coli中表达，免疫BALB/c小鼠，分析其所引起的细胞和体液免疫反应，对其免疫原性的在体有效性进行初步验证，为研究Lpp20 在H.pylori感染中的免疫保护作用及表位疫苗的设计提供实验依据和奠定基础

目前对幽门螺杆菌（H.pylori）感染的免疫机制研究表明, 机体的CD4+ T细胞（Th细胞）在H.pylori 感染的免疫保护机制中起着十分重要的作用。 Lpp20 是H.pylori入侵宿主后可诱导机体产生保护性免疫反应的重要抗原之一，鉴定其Th细胞表位并研究其特异性的T细胞免疫应答特征具有重要的生物学意义和潜在的应用价值。本课题以BALB/c小鼠为模型,采用生物信息学软件SYFPEITHI预测了8条Lpp20的H-2d限制性（I-Ad和I-Ed限制性各4条）Th细胞表位，并合成15aa表位肽。 先用rLpp20免疫BALB/c小鼠，分离脾CD4+T细胞,分别用8条合成肽刺激， 进行淋巴细胞增殖实验检测，鉴定L83-97和 L58-72为Lpp20的Th细胞表位，其 MHC限制性分别为I-Ad和 I-Ad/I-Ed,L83-97和 L58-72主要引起分泌IFN-γ的Th1型细胞反应，并具有协同刺激作用。将两个表位免疫BALB/c小鼠，动物体内同样证明了可以刺激淋巴细胞的增殖。在此基础上，将筛选出的2个Th细胞表位和已鉴定的1个Lpp20的B细胞表位（L108-119）串联,采用大肠杆菌的优势密码子，上述构建的氨基酸序列转化为DNA顺序，克隆入pET22b(+)载体，并在E.coli中表达并纯化。将重组表位免疫BALB/c小鼠，T-B细胞串联表位能引起淋巴细胞增殖和抗体的产生，为研究Lpp20 在H.pylori感染中的免疫保护作用及表位疫苗的设计提供实验依据和奠定基础。