基于“化学成分谱-代谢成分谱-药效成分谱”体系进行独一味资源评价

Lamiophlomis rotata (Benth.) Kudo, a perennial of the genus Lamiophlomis (Lamiacea), is a habitually Tibetan medicine. It has been widely used with the effects of pain alleviation, detumescence, promoting blood circulation, and removing blood stasis in Chinese folk. This plant is getting endangered. To preserve this species, the overground part of the plant could only be applied as the medicinal part as recorded in the Pharmacopoeia of the People's Republic of China 2010 (Ch. P 2010), which needs further assessment of active composition. Moreover, shanzhiside methyl ester and 6-O-acetylshanzhiside methyl ester were used as the marker compound of the plant in the Ch. P 2010 instead of luteolin in the Ch. P 2005. Our previous chromatographic and pharmacodynamic investigations revealed an obvious difference in chromatographic profiles in vitro between the overground part of the plant and the whole plant, but the comparative antinociceptive and anti-inflammatory activities among them. Therefore, further studies are required to elucidate the "common compositions" in chemical composition profiles in vivo between the overground part of the plant and the whole plant, and to identify the active composition profile of Lamiophlomis rotata. Based on the established HPLC-DAD, HPLC-MS/MS and LC/MSD coupled Fraction Collector method, analysis and comparison were carried on among the "chemical composition profile-metabolism profile-active composition profile" of the Lamiophlomis rotata samples, including the whole plant and the overground part of it, which could provide scientific data to support the revision of the official plant part as well as the "marker compound" for Lamiophlomis rotata, and could be applied in the quality control and efficacy evaluation of this plant.

独一味系藏族习用草药，为唇形科独一味属多生年草本植物，镇痛止血和活血化瘀等功效显著，但已近濒危。为了保护资源，2010年版中国药典将其的入药部位由"干燥全草（即地上部分和根）"修订为"干燥地上部分"，定量控制指标也从木犀草素变更为山栀苷甲酯和8-O-乙酰山栀苷甲酯，但这些变更无充分证据支撑。我们的前期研究表明，独一味分别以全草和根作药用部位时，体外化学成分群有明显差异，但抗炎镇痛活性却无明显差异，因此有必要阐明独一味全草及地上部分的体内化学成分群的共性，并对独一味的有效成分群进行表征。本课题综合运用HPLC-DAD和HPLC-MS/MS等方法，考察独一味全草和地上部分在"体外-体内-有效成分群"各环节的表征和沟通，以及通过先进的LC/MSD制备型质谱对微量的代谢产物进行在线识别和富集，为药典对独一味用药部位和"标识成分"的修订提供研究依据，为其资源及功效评价提供了科学依据和物质基础。

本项目研究通过考察独一味全草和地上部分在“体外-体内-有效成分群”各环节的表征和沟通，揭露二者的共有体内有效化学成分群，为药典对独一味用药部位和“标识成分”的修订提供数据支撑。而已建立的“体外-体内-有效成分群”整体评价体系，除了有助于独一味资源及功效评价和质量的全面控制，同时也为中药质量的现代化研究提供了新的思路。共发表SCI论文4篇，申请国家专利1项。.首先应用HPLC-TOF/MS等技术，明确独一味物质组成特征，共鉴定48个化合物，包括19个环烯醚萜类、9个苯乙醇苷类和8个黄酮类。应用HPLC-DAD技术，建立独一味指纹图谱，并对12个不同产地的独一味全草和地上部分进行相似度分析。结果显示所有样品相似度大于0.9，并建立不同产地独一味全草和地上部分9个指标成分的含量测定方法。结果表明8-O-乙酰山栀苷甲酯含量最高，依次是phlorigidoside C、木犀草素-7-O--D-吡喃葡糖苷、山栀苷甲酯和毛蕊花糖苷含量较高。且各分析化合物在不同产地的独一味中含量差别较大，但同一产地味全草和地上部分差异不明显。.采用LC-TOF/MS技术分析大鼠口服独一味后各生物样品中药材的代谢特征。使用亚2微米色谱柱进行血浆、胆汁、尿液和粪便中的代谢产物分析，结果显示共鉴定出39个原型和47个代谢产物，超过一半的代谢产物的生成主要经历II相反应，独一味“代谢成分谱”和“药效成分谱”主要为环烯醚萜类、黄酮类和苯乙醇苷类及其主要的硫酸结合物、葡萄糖醛酸结合物和牛磺酸结合物。基于LC-MS/MS方法建立大鼠血浆中山栀苷甲酯、8-O-乙酰山栀苷甲酯等6种指标性成分的含量测定方法，成功用于不同产地的独一味全草和地上部分大鼠给药后的指标性化合物的药代动力学研究。药代动力学比较研究结果表明，6个分析物的平均血浆浓度-时间曲线显示两组曲线没有显着差异。.以上研究结果表明，同一产地独一味地上和全草的体外化学成分群定性及定量比较分析结果并无明显差异，大鼠口服地上部分及全草后的代谢产物组成方面，及体内6个生物活性成分代谢行为相似，定性及定量比较分析的结果并无显著差异。进一步证实了中国药典对独一味用药部位和“标识成分”的修订意义：2010 年版及2015版中国药典将其入药部位由“干燥全草（即地上部分和根）”修订为“干燥地上部分”，以及定量控制指标也从木犀草素变更为山栀苷甲酯和8-O-乙酰山栀苷甲酯。