外泌体介导的LncRNA-LINC00239在胆囊癌侵袭转移中的作用机制研究

Tumor metastasis is the main cause of death in patients with gallbladder cancer. Exosomes play an important role in tumor metastasis. However, the role of exosomes in the metastasis of gallbladder carcinomas remains unclear. Our previous study found that LncRNA was closely related to the metastasis of gallbladder carcinoma and screened out differentially expressed LncRNA-LINC00239 from the exosome from highly and lowly metastatic potential gallbladder carcinoma cells. It was further confirmed that exosomes rich in LINC00239 significantly promoted the invasion and metastasis of gallbladder carcinoma cells. Bioinformatics prediction: LINC00239 combined with miRNA-200a and affects metastasis related gene. Based on this, we hypothesize that high metastatic potential gallbladder carcinoma cells deliver LINC00239 to low metastatic potential gallbladder carcinoma cells via exosomes, thereby enhancing the latter's metastatic potential. To this end, the project is planned to: (1) clarify the role of LINC00239 in exosomes in invasion and metastasis of gallbladder carcinoma cells; (2) reveal the molecular mechanism of LINC00239 in regulating invasion and metastasis; (3) to investigate the feasibility of LINC00239 in exosomes as a marker or therapeutic target of recurrence and metastasis in gallbladder carcinoma. These provide new ideas for early diagnosis and targeted therapy of gallbladder carcinoma metastasis.

肿瘤转移是胆囊癌患者的主要死亡原因，外泌体在肿瘤转移中扮演重要角色，而外泌体在胆囊癌转移中的作用机制尚不清楚。我们前期研究发现LncRNA与胆囊癌转移密切相关，并从高低转移潜能胆囊癌细胞外泌体中筛选出差异表达的LncRNA-LINC00239，进一步证实富含LINC00239的外泌体显著促进胆囊癌细胞侵袭转移，生物信息学预测LINC00239与miRNA-200a结合影响侵袭转移相关基因。据此我们提出假说：高转移潜能胆囊癌细胞通过外泌体将LINC00239传递给低转移潜能胆囊癌细胞，从而增强后者的转移能力。为此本项目拟进行：（1）明确外泌体中LINC00239对胆囊癌细胞侵袭转移的作用；（2）揭示LINC00239调节侵袭转移的分子机制；（3）探讨外泌体中LINC00239作为胆囊癌病人复发转移标志物及治疗靶点的可行性，为胆囊癌转移的早期诊断和靶向治疗提供新思路。

胆囊癌 (GBC) 是一种起源于胆道，虽然发病率不高但侵袭性极强的癌。尽管亚洲的发病率相对高于西方国家，但由于缺乏早期症状，几乎所有GBC 病例在初诊时即为晚期。 因此，这些患者中的大多数都不适宜手术治疗。 迄今为止，包括化疗和放疗在内的辅助治疗是治疗大多数 GBC 患者不可或缺的治疗方案。然而，这些常规疗法的疗效及其有限，并且大多数患者会迅速复发并同时产生化疗、放疗耐药性。 因此，GBC 的总体预后极差，平均生存期仅有 13.2~19个月。尽管在过去几十年中，在挖掘GBC 中的促癌、抑癌基因方面做出了巨大努力，但仍然缺乏可在临床实践中常规使用的独立的生物标志物。因此，探索研究可能作为治疗 GBC 患者的新型诊断生物标志物和可用于临床治疗的靶点至关重要。. 长链非编码RNA(LncRNA)来源于基因间DNA、内含子或与其他基因的反向剪接，lncRNA 可参与多种生物过程，并且是转录和转录后水平病理过程的关键调节因子。 前期，我们通过转录组学测序及LncRNA芯片筛选并选定外泌体介导的LncRNA-LINC00239作为促进胆囊癌侵袭及转移的研究对象。体外表型及功能学研究提示该分子具有促进胆囊癌增殖、侵袭及转移的能力。并且通过核质分离、RT-PCR、荧光原位杂交(FISH)等实验确定其细胞内定位，通过Western Blotting，双荧光素酶报告基因、RNA pulldown、RNA Immunoprecipitation (RIP)、免疫荧光等实验结合生信分析确定其下游miRNA与直接作用的下游蛋白，勾勒并验证下游基因与信号通路的表达调控网络。同时我们还拟对外泌体介导的LncRNA-LINC00239进行结构鉴定、生物学活性研究、以及其在基因信息传递过程中的机制研究，并判断其在胆囊癌发生发展过程的重要意义。