雄激素通过Wnt信号通路调控卵巢颗粒细胞端粒酶活性进而影响卵子质量的机制

The oocyte quality is one of the key factors of in vitro fertilization - embryo transfer (IVF-ET) treatment. Our previous study demonstrated that the telomerase activity (TA) of ovarian granulosa cells is correlated with oocyte quality and the outcome of IVF-ET treatment. Furthermore, the TA level was positively correlated with serum testosterone (T). It was indicated that androgen may be involved in the molecular regulation of TA and thereby affects the oocyte quality. Other studies found that the androgen is involved in the regulation of Wnt signaling pathway, which is positively correlated with TA. In order to clarify the molecular mechanisms, we plan to explore the correlation between the androgen level of ovarian follicular fluid, telomerase activity and Wnt signaling pathway of ovarian granulose cells and oocyte quality. Therefore we will shed light on the role of androgen in participating in regulating oocyte quality, and will provide a new insight of important regulatory mechanisms of oocyte quality and new scientific theories for improving embryo quality during assisted reproduction treatments.

卵子质量是影响体外授精-胚胎移植治疗（IVF-ET）成功率的关键因素。本课题组前期研究证实雄激素与卵巢颗粒细胞的端粒酶表达有关，而端粒酶活性又与卵子质量及IVF-ET治疗结局息息相关，推测雄激素可能通过调控端粒酶活性参与了对卵子质量的调控。另有研究发现，雄激素参与调节和端粒酶之间存在正向调控环的Wnt信号通路。为了明确雄激素是否能通过Wnt信号通路调控端粒酶表达，进而影响卵子质量，本课题拟研究卵巢卵泡液中雄激素水平、颗粒细胞端粒酶及Wnt信号通路的关键因子与卵子质量的关系，获得雄激素通过Wnt信号通路诱导端粒酶活性的直接证据，进一步探讨雄激素通过调节端粒酶活性参与调控卵子质量的分子机制。这将可能发现一个涉及卵子质量的重要调控环节，为提高辅助生殖治疗中的胚胎质量乃至其后代健康素质提供新的科学理论与手段。

既往研究证实雄激素不仅与卵巢颗粒细胞的端粒酶表达有关，还参与调节和端粒酶之间存在正向调控环的Wnt信号通路，而端粒酶活性与卵子质量及IVF-ET治疗结局息息相关。为了明确雄激素是否能通过Wnt信号通路调控端粒酶表达而影响卵子质量，本课题组收集了77例接受IVF/ICSI助孕治疗的患者标本，通过检测取卵日卵泡液中睾酮水平、颗粒细胞端粒酶活性及β-catenin，发现38岁以上者取卵日卵泡液中睾酮水平、黄素化颗粒细胞的端粒酶活性及β-catenin的表达均明显低于38岁及以下者，分别为： 0.5（四分位数间距IQR0.88）vs 2.99（3.46）、0.12（0.32）vs 0.99（0.85）及0.36（0.33）vs 0.99（1.01）；三者与女性年龄呈明显负相关、与卵子质量呈明显正相关。提示：三者不仅对预测体外授精治疗的临床结局有一定参考价值、三者之间还可能存在对卵子质量的复杂调控机制。因此，为了验证雄激素是否通过Wnt/β-catenin信号通路诱导端粒酶活性，本课题组进一步用1μmol/L浓度的睾酮作用于雌激素受体（ERα）阴性的宫颈癌SiHa细胞，加或不加100nmol/L的Wnt/β-catenin信号通路拮抗剂BC2059，48小时后以Native-PAGE银染法检测端粒酶活性、Western Blot电泳法检测β-catenin蛋白的表达。结果发现，睾酮能显著刺激SiHa细胞的端粒酶活性，BC2059不能抑制睾酮对端粒酶活性的诱导作用。结论：接受IVF/ICSI治疗者，取卵日卵泡液中睾酮水平、黄素化颗粒细胞的端粒酶活性及β-catenin的表达对预测卵子质量有一定价值；雄激素对端粒酶活性的调控机制与Wnt信号通路的相关性需要更进一步探索。