激酶中多种蛋白质翻译后修饰分析探索性研究

大量的研究证明，激酶是一类十分重要的蛋白质翻译后修饰酶，介导着蛋白质的磷酸化修饰，在细胞信号级联放大转导、基因表达和酶活性调控等生物学过程中发挥着十分重要的功能。最近，我们研究发现，在某些激酶中除磷酸化外还存在着乙酰化等新的修饰类型，与细胞癌变密切相关，暗示着激酶这类特殊的生物大分子可能还存在着其它的功能表现形式，有重大科学意义。然而，组织细胞成分复杂，多种修饰类型并存的蛋白质含量往往很低，丰度差异很大,这使得单纯利用现有分析方法从激酶中准确鉴定除磷酸化外的其它类型的蛋白修饰较难。基于此，本项目拟在成功预实验基础上，将标签蛋白/激酶融合技术与鸟枪法技术有机结合，优化激酶亲和纯化、蛋白电泳分离、胶内酶解、LC/MS/MS分析和数据信息处理等实验步骤，研究探索从激酶中鉴定乙酰化、甲基化等翻译后修饰的新技术，为进一步深入揭示激酶中除磷酸化外的其它功能表现形式奠定初步的方法学基础。