活血化瘀法对肿瘤干细胞样细胞基于血小板活化而逃逸NK细胞免疫监视的干预研究

肿瘤干细胞的存在是肿瘤发生转移的主要原因，它由原发部位脱落进入循环系统，逃逸免疫细胞的监控，进而在远隔组织内种植形成转移。在此过程中，血小板的活化以及NK细胞的免疫监视起着关键的调节作用。中医活血化瘀法有潜在的预防肿瘤远处转移的作用，但目前还缺乏有力的实验证据。本研究以肿瘤干细胞基于血小板活化而逃逸NK细胞免疫监视为切入点；以三种不同强度活血化瘀中药为干预措施，以鼠源的乳腺癌4T1细胞系为研究对象；根据肿瘤干细胞的表型和特性分离纯化4T1肿瘤干细胞样细胞（CSLCs）；建立CSLCs与血小板、NK细胞共培养体外实验模型及CSLCs小鼠血行转移模型；同时采用相关技术进行与血小板活化，NK细胞活性，以及TGF-β，NK细胞表面NKG2D活性等有关的分子及蛋白的检测。以期从肿瘤干细胞与循环免疫的角度探讨活血化瘀法对CSLCs引起的肿瘤血行转移的干预作用，为活血化瘀法预防肿瘤血行转移提供实验依据。

本研究以肿瘤干细胞基于血小板活化而逃逸NK细胞免疫监视为切入点；以三种不同强度活血化瘀中药为干预措施，以鼠源的乳腺癌4T1细胞系为研究对象；根据肿瘤干细胞的表型和特性分离纯化4T1肿瘤干细胞样细胞（CSLCs）；建立CSLCs与血小板、NK细胞共培养体外实验模型及CSLCs小鼠血行转移模型；同时采用相关技术进行与血小板活化，NK细胞活性，以及TGF-β，NK细胞表面NKG2D活性等有关的分子及蛋白的检测。研究结果：1. 肿瘤干细胞能高效活化血小板，实现血小板粘附包被，进而逃避NK细胞对其的杀伤作用；2. 表明不同活血化瘀中药提取物在体外试验中均能不同程度抑制4T1细胞以及肿瘤干细胞的增殖，且呈剂量与时间依赖关系；3.不同活血化瘀中药提取物在体外试验中并没有观察到能降低CSLCs诱导的的血小板活化(甚至有些组别还有升高趋势)，但可以提高NK细胞免疫功能，表现为活化的NK细胞数目增加以及干扰素释放水平的上升；4.在体实验证实，不同活血化瘀中药可以抑制肿瘤干细胞导致的人工肺转移，而这种抑制作用部分是由于肿瘤干细胞介导的免疫逃逸，但可能还存在其它的途径，因为在血小板活化，及NK细胞免疫功能方面，研究结果不尽如意。但总之，在活血化瘀药抑制肿瘤的血行转移方面取得了阳性实验结果，为临床上应用活血化瘀药防止肿瘤转移提供了实验依据。