γδT细胞自身免疫治疗SIV/M.tb共感染中国恒河猴的初步探讨

M.tb infection is very common among people infected with HIV, about four hundred thousand HIV-infected patients die from M.tb infection every year. Recent research demonstrated that HIV infection promotes M.tb spread, resulting in M.tb disease progression. However, the mechanism(s) for HIV- mediated enhancement of M.tb infection remain to be determined. Clinical studies reported that HIV infection inhibited the function of γδ T cells. It is known that IL-22 produced by γδ T cells has a key role in the host defense against M.tb infection. Our investigation on SIV/M.tb co-infection of Chinese rhesus monkey model showed that comparing with SIV or M.tb mono-infection, co-infected monkeys had much short survival rate and lower expression of IL-22, although there was no significant differences in number of CD4+, CD8+ T cells. These results indicated that to expand and activate γδ T cells suppressed by HIV infection should be beneficial for preventing M.tb spreeding. Therefore, we will use Zoledronic acid in combination with IL-2 and IL-23 to expand and activate the IL-22+γδ T cells isolated from SIV-infected monkeys ex vivo, and then transfer these cells back to animals, expecting to increase the suvival rate and IL-22+γδ T cells expansion in the infected monkeys. These investigations shall provide critical scientific data for the development of γδ T cell-based individualized anti-M.tb therapy.

结核已成为艾滋病毒（HIV）感染者最常见合并感染，全球每年约40万艾滋患者死于结核感染。新近研究表明， HIV能促使结核菌（M.tb）扩散，使病情加剧，但HIV促进M.tb感染的机制尚不清楚。临床研究显示，HIV感染抑制γδT细胞功能，而γδT细胞产生的IL-22在抗结核感染中发挥至关重要作用。我们研究猴艾滋病毒（SIV）和M.tb共感染中国恒河猴的前期工作显示，尽管CD4+T细胞和CD8+T细胞的相对和绝对计数无显著改变，共感染猴的生存时间及IL-22表达水平显著下降。这些结果提示，激活和增殖受HIV抑制的γδT细胞将有利于阻止M.tb在体内扩散。因此，本项目拟用唑来膦酸联合IL-2/IL-23在体外扩增和激活IL-22+γδT细胞，自体回输给共感染猴，期待延长猴的生存期及恢复IL-22+γδT细胞的功能。这项研究将为开展以γδT细胞为基础的抗结核天然免疫个体化治疗提供极为重要的科学依据

结核已成为艾滋病毒（HIV）感染者最常见合并感染，HIV能促使结核菌（M.tb）扩散，使病情加剧，但HIV促进M.tb感染的机制尚不清楚。因此，利用非人灵长类动物建立符合人类结核病（TB）和艾滋病（AIDS）传播和发病特征的模型至关重要。本项目利用生物安全三级实验室平台，建造组合负压猴笼，使健康恒河猴充分接触来自M.tb感染并伴有咳嗽症状猴子所在猴笼的空气，使其感染M.tb。T细胞干扰素-γ释放实验及血液学检测结果表明中国恒河猴M.tb自然感染动物模型构建成功。此外，我们通过静脉注射不同毒株（SHIVSF162P3N, SHIVKU-1, SIVmac239和SIVmac251）、以及通过多种感染途径（静脉注射、阴道和直肠接触）用SHIVSF162P3N毒株感染中国恒河猴，检测动物的血浆病毒载量和CD4+T/CD8+T细胞比值，证明模型成功构建。为了检验该模型是否能模拟人类感染HIV的疾病进程，我们检测了SIV慢性感染的中国恒河猴的免疫激活情况。结果显示，SIV感染也能消耗外周和肠道淋巴组织中CD4+T细胞，引起外周和肠道淋巴组织中T细胞持续性的免疫激活，同时促进T细胞增殖。Vγ9δ2（Vγ9）T细胞是机体免疫应答的重要成员，被证实在HIV及M.tb感染中发挥重要作用。本项目中，我们探索建立了一种简单、经济、高效地培养中国恒河猴外周血来源Vγ9细胞的方法。在含有猴自体血清、5μM唑来膦酸及100 U/ml白介素2的RPMI 1640培养条件下，体外扩增8天后，猴Vγ9 T cells纯度大于90%。经过体外培养得到的猴Vγ9 T细胞都处于免疫激活状态。使用唑来膦酸及白介素2联合免疫治疗SIV感染恒河猴，能够显著提高猴体内Vγ9 T细胞数量，并对在猴体的免疫激活应答中发挥作用。这项研究将为开展以γδT细胞为基础的临床抗结核天然免疫个体化治疗提供极为重要的科学依据。