中药复方提取物HNA-1对SIV慢性感染恒河猴幼稚型CD4+T细胞发育、迁移和增殖的影响

AIDS is a major infectious disease all around the world, so far, no successful prophylactic vaccine have been applied to the clinic, meanwhile,there are some shortages existing in highly active antiretroviral therapy(HAAT),such as life long drug dependence、high price、serious side effects and virus resistance mutation, even with successful antiviral therapy,not all patients are bound to reconstruct immune system. A number of studies have reported that both single Chinese herb and TCM compound or TCM compound extract can improve the function of CD4+T in AIDS infections,but whether they can reconstruct immune system lack of evidence,what`s more, the targets and mechanism remains unclear. HNA-1 is free to use recommended by Aids Prevention group in our province,the drug has obtained satisfied effects, during six years`Clinical application.;it can improve decreased CD4+T dramaticly in rhesus macaque with chronic SIV infection,especially infantile cell. Based on this,the project gets started from Immune reconstitution,searches for the effects and adjustment on the origin、differentiation and development、migration and proliferation of CD4+T in rhesus macaque with chronic SIV infection,which is given HNA-1,so as to make clear the targets and mechanism of HNA-1 in AIDS prevention,facilitate the research of AIDS prevention with TCM,and develop new drugs for AIDS treatment.

AIDS是全球性的重大传染疾病，迄今为止尚没有能成功应用于临床的预防性疫苗，而高效抗逆转录病毒治疗又有终身赖药、费用昂贵、易导致严重的副反应和病毒产生耐药突变等不足，即使成功的抗病毒治疗也并不一定能带来免疫重建。多项研究报道，单味中药或复方及其提取物具有提高感染者CD4+T细胞的作用，但能否免疫重建尚缺乏大量证据，并且其作用靶点和机制均不清楚。HNA-1为我省艾滋病防治小组推荐免费使用的中药，临床应用近六年来疗效满意；以该药治疗猴免疫缺陷病毒（SIV）感染的恒河猴能显著提高减少的CD4+T细胞，特别是幼稚型细胞。在此基础上，本研究以免疫重建为切入点，研究HNA-1对SIV感染恒河猴幼稚型CD4+T细胞的来源（胸腺输出或胸腺外增殖）、分化发育、迁移和增殖的影响及调控，以明确HNA-1防治AIDS的调控靶点与免疫重建机制，促进中医药防治AIDS的研究，推动AIDS新治疗策略的药物研发。

课题“中药复方提取物HNA-1对SIV慢性感染恒河猴幼稚型CD4+T细胞发育、迁移和增殖的影响系小额资助项目，编号：81274169。立项后即开始研究，于2013年12月按计划全部完成实验研究工作。论文正在整理过程中。. 感染毒株SIVmac239由中国科学院昆明动物所郑永唐博士馈赠。实验动物为恒河猴，共计9头，全部为雄性，体重4.75-7.2 Kg，4-8岁，外观健康。经血清学检测猴逆转录D型病毒（SRV）和猴T淋巴细胞I型病毒（STLV-I）抗体阴性，结核菌素阴性，痢疾菌阴性，由广东灵长类实验动物中心提供，选择8头随机分为2组，每组4只，分别给予HNA-1灌胃治疗及生理盐水灌胃。. HNA-1药粉成人服用剂量为71g生药/天，即14.314g干膏粉/人。每天28g药粉配成混悬剂，加水至100ml，加入β内含物215mg，每猴给20ml。每日1次给药，连续给药2个月。. 观察指标包括动物一般情况观察、病毒载量检测、外周血CD4及其初始、记忆亚群分析、单核细胞亚群的分析、调节性T细胞（Treg）的检测、Th17及淋巴细胞表达细胞因子的检测、CD4活化的检测、CD4表达CD31+及增殖的检测、胸腺细胞中CD34+细胞比例及胸腺CD4、CD8增殖的检测、胸腺CD4、CD8凋亡的检测、胸腺细胞发育阶段的分析、胸腺细胞表面表达CD127（IL-7R）的检测、巨噬细胞、DC细胞、表皮细胞在胸腺中比例、淋巴结、胸腺的H.E病理，及胸腺的特殊染色、胸腺的免疫荧光染色及激光共聚焦检测、胸腺电镜等。. 结果表明，HNA-1能增加动物体重、通过促进胸腺输出，增加外周初始型CD4的比例。其作用的主要机制，为增加胸腺内巨噬细胞、树突状细胞与胸腺上皮细胞与T细胞的比例，促进胸腺细胞发育后移、同时促进发育成熟的初始型CD4 T细胞从胸腺动员到外周，以及更多CD34+细胞进入胸腺。从外周PBMC表达细胞因子的情况来看，这些改变可能与炎症及IL-10信号通路有一定关联。这项研究部分阐明了HNA-1的作用机制，为通过影响CD4细胞增殖、发育和分化来研发出HIV-1感染的辅助治疗药物，提供了干预手段和实验数据的参考。