Twist在HPV介导的宫颈癌细胞衰老逃逸中的作用及其机制研究

宫颈癌发病的首要病因在于高危HPV感染，然而有关HPV恶性转化功能的内在机制和过程，目前仍未明确。从HPV感染至肿瘤形成历时漫长，细胞衰老障碍是宫颈上皮细胞永生化和病变恶性进展的重要特征。基于前期研究结果，我们推测Twist蛋白可能参与HPV介导的宫颈癌细胞衰老逃逸过程，其作用机制尚不清楚。本项目拟构建模拟HPV感染宫颈上皮恶性转化过程的体内外模型，从组织、细胞、亚细胞、分子等多个层面，采用免疫共沉淀、蛋白质组技术、RNA干扰技术、染色质沉淀技术、EMSA、SAβ-gal活性测定等探讨Twist在HPV介导的宫颈上皮癌变及衰老逃逸中的作用，明确其作用靶点，阐明其调控机制。旨在进一步丰富高危HPV恶性转化机制的理论，为以Twist为分子靶完善和补充宫颈癌的早期防治措施、实现降低我国宫颈癌发病率和死亡率的目的提供实验数据和奠定理论基础。

宫颈癌发病的首要病因在于高危HPV感染，然而有关HPV恶性转化功能的内在机制和过程，目前仍未明确。从HPV感染至肿瘤形成历时漫长，细胞衰老障碍是宫颈上皮细胞永生化和病变恶性进展的重要特征。本项目通过构建模拟HPV感染宫颈上皮恶性转化过程的细胞模型及组织标本，从组织、细胞、亚细胞、分子等多个层面，采用免疫共沉淀、免疫荧光技术、SA-β-gal活性测定、miRNAs芯片等探讨了TWIST2在HPV介导的宫颈上皮癌变及衰老逃逸中的作用，结果显示：1）宫颈癌组织中HPV16 E7与TWIST2的表达显著正相关，HPV16 E7直接上调TWIST2表达及其转录活性；2）TWIST2过表达可以诱导宫颈上皮细胞产生EMT过程而恶性转化，获得进一步侵袭转移能力；3）由抑制细胞衰老而诱导EMT过程是TWIST2促进宫颈癌进展和转移关键机制；4）而TWIST2通过转录调控下游的miRNAs，尤其是miR-221，实现其促进宫颈癌侵袭、进展的功能。我们的研究描述了HPV感染-TWIST2过表达-miRNAs调控-衰老逃逸及EMT功能实现的路线图，进一步丰富了高危HPV恶性转化宫颈上皮机制的理论，为将TWIST2为分子靶完善和补充宫颈癌的早期防治措施、实现降低我国宫颈癌发病率和死亡率的目的提供了实验数据。