抗CD146抗体在异基因造血干细胞移植后急性移植物抗宿主病中的作用及机制研究

The role of anti-CD146 antibody on acute graft versus host disease after allogeneic hematopoietic stem cell transplantation is not known so far. We have found that the anti-CD146 antibody AA98 significantly prolonged aGVHD-associated survival . And the proportions of CD146+CD4+T, CD146+CD8+T, CD146+NK and CD146+DC in aGVHD mice was significantly higher than those in control mice. So we hypothesize that anti-CD146 antibody AA98 treatment could prevent aGVHD by inhibiting the expression of CD146, which could inhibit the recruitment of T cells and reduce the Inflammation in aGVHD target organs. We will explore the effects and mechanisms of anti-CD146 antibody AA98 treatment on mouse aGVHD after allogeneic hematopoietic stem cell transplantation. Meanwhile, we will also observe the influence of the anti-CD146 antibody treatment on graft versus Leukemia effect.

CD146抗体对异基因干细胞移植后急性移植物抗宿主病的作用目前还未见报道，我们的初步研究发现，CD146抗体AA98能够延长在异基因造血干细胞移植后急性移植物抗宿主病模型小鼠的生存，而且相比于正常小鼠，aGVHD模型小鼠中小肠CD146阳性的CD4+T细胞、CD8+T细胞、NK细胞和DC细胞比例和数量显著升高。我们推断， CD146抗体AA98可以抑制小鼠aGVHD模型中CD146的表达，进而抑制T细胞募集到靶器官，降低组织的炎症反应，对aGVHD起到治疗作用。本项目将对CD146抗体AA98对小鼠异基因造血干细胞移植后急性移植物抗宿主病中的作用及机制进行详尽的探讨，明确CD146抗体对异基因移植后aGVHD的抑制作用，同时建立带有白血病的小鼠异基因造血干细胞移植后aGVHD小鼠模型明确AA98抗体在抑制aGVHD的同时是否影响移植物抗白血病作用。

AA98是一种针对CD146分子的功能性抗体，它能有效减少CD146分子的二聚化从而阻断NF-κB的信号通路。AA98对急性移植物抗宿主病的作用目前还没有报道，鉴于aGVHD与EAE都是由T细胞介导的疾病模型，以及在炎症性肠炎中炎性淋巴细胞起主要作用,而在前期的研究中我们发现，aGVHD小鼠有较高水平CD146的表达，CD146阳性的CD4+T细胞，CD8+T细胞以及CD146阳性的NK细胞和DC细胞都较对照组显著升高。为此，我们期望AA98抗体能够通过减少aGVHD靶器官内皮细胞CD146的表达来抑制淋巴细胞特别是T细胞募集到靶器官，从而对aGVHD起到有效治疗效果。本项目建立了小鼠急性移植物抗宿主疾病模型，并给予CD146的抗体AA98进行治疗，观察其对aGVHD的治疗作用，并对其相关作用机制进行详细的探讨。同时，对AA98是否影响移植物抗白血病反应进行评估。首先我们有效清除了AA1和AA98抗体中的内毒素，使内毒素水平降到了10EU/ml以内，得到可用于注射aGVHD小鼠的抗体。aGVHD小鼠脏器中CD146的表达显著高于骨髓移植对照组。aGVHD生存实验表明，AA98能显著抑制异基因造血干细胞移植后aGVHD的发展，延长aGVHD小鼠的生存但不能阻止aGVHD的发生：AA98显著延长aGVHD小鼠存活时间；显著减轻aGVHD小鼠的体重下降；减轻小鼠aGVHD临床症状，降低临床积分。流式结果显示AA98能减少T细胞的活化而不影响T细胞的浸润；AA98显著下调小鼠脾脏中CD4+T细胞和CD8+T细胞中IFN-γ和TNF-α的分泌。因此我们得出结论，AA98能显著抑制aGVHD的发展但不能阻止其发生，其机制可能是通过抑制T细胞活化以及其细胞因子的分泌。