CLEC14A在阿霉素肾病足细胞损伤中的保护作用与分子机制

Podocytes play an important role in maintaining normal glomerular function and structure, and podocyte injury leads to albuminuria and glomerulosclerosis, albuminuria affects millions of people, and is an independent risk factor for kidney failure and death. CLEC14A (C-type lectin domain family 14 member A) is a tumor endothelial cell marker protein that is known to play an important role in tumor angiogenesis. Our preliminary studies found the expression of CLEC14A in kidney, in kidney biopsies from focal segmental glomerular sclerosis (FSGS) patients and the kidney from adriamycin-induced nephropathy mice, the expression of CLEC14A was down-regulated. Immunofluorescence and western blot shows down-regulation of CLEC14A in podocyte under adriamycin stimulation. These results indicate that CLEC14A is a potentially important therapeutic target in podocyte injury. Therefore, the present study was designed to elucidate the contribution of CLEC14A to glomerular podocyte injury in adriamycin-induced nephropathy. Firstly, we investigate the expression pattern of CLEC14A in adriamycin-induced nephropathy. Secondly, CLEC14A deletion mice and konckdown/overexpression of CLEC14A in podocyte were used to assess the regulation of uPAR signal pathway in adriamycin-induced podocyte injury. This project may provide new insight into both the basic and clinical research on the pathogenesis and the potential theraputic targets of proteinuric kidney disease.

蛋白尿是肾衰竭的独立危险因素，足细胞损伤是蛋白尿产生的关键，针对足细胞损伤的治疗具有重要的临床意义。CLEC14A是C型凝集素蛋白家族成员，在肿瘤血管生成中有重要作用。我们前期工作首次明确CLEC14A在肾脏中表达，并且在局灶节段性肾小球硬化病人及阿霉素肾病小鼠肾脏中表达降低，免疫荧光双标共定位显示CLEC14A在阿霉素肾病肾小球足细胞内表达显著降低，提示CLEC14A表达变化可能是调控足细胞损伤的重要因素之一。为此，本研究通过临床标本、动物模型、细胞实验等方法明确CLEC14A在足细胞中的作用；体内CLEC14A基因敲除小鼠、体外足细胞中沉默及过表达CLEC14A，进一步应用电镜、免疫荧光、共聚焦显微镜等技术深入探讨CLEC14A通过uPAR信号通路调控足细胞损伤的作用机制。此研究将拓展人们对CLEC14A功能的认识，为寻找治疗足细胞损伤引起的蛋白尿性肾病新靶点提供实验和理论依据。

局灶节段性肾小球硬化( FSGS)是肾病综合征常见的病理表型，是导致终末期肾病的主要病因之一。高度分化的足细胞损伤是FSGS的主要特征，因此，寻找有效治疗和改善足细胞损伤的靶点对于FSGS的治疗具有重要的临床意义。PRRs包括表达在膜上的C型凝集素受体(CLR)和Toll样受体(TLR)；表达在胞质的NOD样受体(NLR)、RIG-I样受体(RLR)和多种DNA感应分子等。在肾脏疾病发病过程中，肾脏细胞及免疫细胞中的模式识别受体可被激活并启动主要的天然免疫通路，如TLR4、TLR5、NOD2等可通过调控足细胞炎症反应影响肾脏疾病的发病进程。然而CLRs在肾脏疾病足细胞损伤中的作用仍不清楚且关于CLRs在肾脏疾病中的功能方面的研究非常少，CLEC14A是CLR超家族14亚家族中的一员。近期研究发现，在胚胎发育过程中CLEC14A特异性地表达于血管内皮细胞，参与调控VEGF信号通路并促进肿瘤的血管生成。由于炎症反应以及VEGF信号通路都参与了肾脏疾病的发生发展过程，提示CLEC14A可能与肾脏疾病进展的关键调控通路有关。因此，本课题重点关注CLEC14A在足细胞损伤中的功能，揭示其在调控足细胞骨架结构、炎症反应及粘附等方面中的作用。我们首次发现CLEC14A在阿霉素诱导的FSGS小鼠肾脏中表达降低，同时在多种足细胞病患者肾活检标本中CLEC14A的表达也降低。进一步实验发现，敲除CLEC14A明显加重阿霉素诱导的FSGS小鼠的足细胞损伤和蛋白尿生成，并伴随炎症细胞浸润及炎症反应增加。在机制上，我们首次发现CLEC14A可与HMGB1结合并抑制其分泌，进而抑制HMGB1介导的炎症反应，EGR1 通路的激活等。本研究进一步充实了对CLEC14A生物学功能的新认识，并为FSGS的防治提供了新的靶点和思路，具有重要的理论意义和潜在的应用价值。