Notch信号在慢性粒细胞白血病急性变中的作用及分子机制研究

慢性粒细胞白血病（CML）急性变是导致患者死亡的最主要原因，阐明其机理将有助于为CML的治疗提供重要依据。依赖于BCR/ABL的信号通路是CML慢性期的病变基础，但在CML急性变过程中需要其它信号通路的参与。我们的研究及相关研究均表明Notch信号异常是导致CML急性变原因之一，但具体分子机制尚不明。为进一步阐明两者关系，本课题拟利用强力霉素诱导、造血干细胞特异性启动子驱动的CML模型，建立他莫昔芬调控Notch信号的TetO-Tal1-bcr/abl：ERT-NIC转基因小鼠及条件性剔除Notch信号关键下游分子RBP-J的TetO-Tal1-bcr/abl：Mx-Cre-RBP-Jflox的转基因小鼠。以他莫昔芬诱导系统来上调Notch信号，以干扰素诱导RBP-J剔除来阻断Notch信号，体外、体内深入研究Notch信号在CML干细胞维持及CML急性变中的作用机制。

慢性粒细胞白血病（CML）是发病率较高的血液系统恶性肿瘤，急性变是导致患者死亡的最主要原因，白血病干细胞的存在是疾病复发及进展的基础，阐明急性变的机理及CML赖以生存的信号途径将有助于为CML的治疗提供重要依据。. 我们首先分析Notch信号相关基因在CML中的表达。发现K562细胞的Notch信号相关分子表达水平在白血病细胞中处于中等水平，但Notch1在CML病人表达明显增高，尤其是急性变期。我们研究了伊马替尼作用于CML细胞后Notch信号相关基因的表达情况，发现伊马替尼明显下调Notch1及Hes1的表达，且后者的下调与前者呈一定剂量依赖性效应，提示伊马替尼对CML的杀伤可能通过Notch信号发挥作用.. 为了获得可以激活Notch信号的配体,我们成功地构建了原核表达载体pET-hJagged1, 并通过原核表达系统获得了TRX-Jagged1融合蛋白, 为进一步活化Notch信号奠定了基础。经TetO-bcr/abl小鼠及Tal1-tTA小鼠交配，获得转基因小鼠，其造血系统改变符合CML。利用PCR和Southern blot对小鼠基因型进行鉴定，发现转基因小鼠同时表达BCR-ABL(b3a2)及tTA，提示成功构建了CML转基因小鼠,也为下步研究奠定了基础。. 用OP9-DLL1或基因工程获得配体激活Notch信号，Notch信号活化促进了CML细胞的增殖，抑制其凋亡。在CML干细胞水平，Notch信号不利于CML干细胞的增殖，这与CML干细胞凋亡增加有关，而与细胞周期无关。提示Notch信号在CML细胞及干细胞水平发挥不同的作用。进一步研究发现，Notch信号对CML的调控可能是通过Hes1而不是MYC或Hey1发挥作用。Notch信号促进了K562细胞增殖，这可能与Caspase3的表达下降并使凋亡抑制有关。. 总之，我们发现Notch信号参与了CML的发生发展，与CML的急性变及干细胞的维持密切相关，通过Caspase3而不是MYC调节CML的病变过程。