基于整合素信号/离子通道变化探讨补髓生血颗粒治疗慢性再生障碍性贫血的作用机制

We have validated that integrin VLA (beta 1)subfamily adhesion molecules were aberrantly expressed while the signal pathway mediated by it and the relevant voltage-gated potassium channel were also aberrantly expressed in our previous studies. This project was designed to further explore whether there was a generality in the aberrant expression of the integrin β2、β2 subfamily and to discuss whether the change of relevant ion channel was the foundation of the above aberrant expression and to study the effect of marrow-supplementing and blood-engendering granule on the aberrant expression. FCM was used to detect the expression of the integrin β2,β3subfamily adhesion molecules, as well as Western Blot and RT-PCR were used to detect the protein and gene expressions of relevant signal pathway key enzymes and channel KCa3.1. Meanwhile Elisa method was applied in the related receptors expressions of the integrin β2、β3subfamily to screen target molecules associated with this disease and the abnormal mechanism of the integrin signal pathway and the ion channel. Furthermore, the biological basis of CAA pathogenesis was clarified in a protein, enzyme, gene and molecular level and scientific evidences were provided for the reinforcing kidney drugs regulating hematopoietic adhesion signal transduction pathway of CAA patients.

我们在前期研究中验证了慢性再生障碍性贫血患者存在整合素VLA（β1）亚家族粘附分子表达异常，并且由其介导的信号途径以及与之相关的电压门控钾通道（Kv1.3）也存在异常表达，为进一步探讨这种异常表达在整合素β2、β3亚家族是否具有共性，探讨相关离子通道的变化是否是上述异常的基础，同时研究补髓生血颗粒对之影响，我们设计了此课题。本研究主要采用FCM法检测整合素β2、β3亚家族粘附分子表达；分别采用Western Blot法、RT-PCR法检测整合素β2、β3亚家族粘附分子，与之相关信号通路关键酶类以及中电导钙激活钾通道的蛋白和基因表达；采用Elisa法检测整合素β1、β2、β3亚家族相关受体表达，筛选出与本病发病相关的靶分子及整合素信号通路、离子通道异常的机理，进而在蛋白、酶、基因和分子水平上阐明CAA病机的生物学基础，并为补肾生血中药调节CAA患者造血粘附信号转导通路提供科学依据。

我们在前期研究中验证了慢性再生障碍性贫血（CAA）患者存在整合素VLA（β1）亚家族粘附分子表达异常，并且由其介导的信号途径以及离子通道（Kv1.3）也存在异常表达，为进一步探讨这种异常表达在整合素β2、β3亚家族是否具有共性，探讨相关离子通道的变化是否是上述异常的基础，同时研究补髓生血颗粒对之影响，我们设计了此课题。本研究主要采用FCM法检测整合素β2、β3亚家族粘附分子表达；分别采用Western Blot法、RT-PCR法检测整合素β2、β3亚家族粘附分子，与之相关信号通路关键酶类以及中电导钙激活钾通道的蛋白和基因表达；采用Elisa法检测整合素β1、β2、β3亚家族相关受体表达，筛选出与本病发病相关的靶分子及整合素信号通路、离子通道异常的机理，进而在蛋白、酶、基因和分子水平上阐明CAA病机的生物学基础，并为补肾生血中药调节CAA患者造血粘附信号转导通路提供科学依据。研究结果表明CAA患者整合素β2、β3亚家族粘附分子及相关信号通路关键酶类、离子通道的基因及蛋白表达存在表达的异常，与正常组比较存在显著差异，有统计学意义。本研究将分子生物学的细胞信号转导理论以及离子通道理论应用到CAA的发病机理的探讨上，在理论和实践上具有明显的原创性和科学性。在以往对CAA整合素介导骨髓造血细胞粘附作用研究基础上，再次以整合素β2、β3亚家族粘附分子介导的细胞内信号途径及相关因素为切入点，从CAA患者外周血的角度，观察粘附分子表达、信号通路关键酶类和KCa3.1通道的异常，进一步从蛋白、酶学、基因层面上深入、系统地解读CAA的病机与整合素介导信号途径异常的相关性，国内外尚无此研究的报道，具有一定的创新性。并且在国内率先对使用补髓生血颗粒治疗CAA的有关整合素β2、β3亚家族介导的粘附信号通路的疗效机理进行深层次的探讨，具有明显的中医特色和独到之处，丰富了中医 “补肾生血”的理论内涵，在较高的水平上提升中医的理论研究工作水平。以上研究成果发表论文12篇，培养博士后1名，硕士研究生12名。