分子伴侣(Cosmc)基因突变对消化道肿瘤转归及抗原表达的影响

肿瘤发生与糖链的变化密切相关,T-synthase活性降低或缺失,导致糖蛋白糖基化不完全,表达Tn/STn抗原。我们前期研究发现,分子伴侣Cosmc是T-synthase正确折叠发挥酶活性所必需;Cosmc基因突变影响T-synthas活性,可致选择性IgA肾病及Tn综合征,某些肿瘤细胞系存在Cosmc基因突变;Tn(+)胃癌细胞T-Synthase活性下降;因此我们提出"消化道肿瘤存在Cosmc基因突变并影响肿瘤转归"。为证明此观点,本研究拟分离表达Tn/STn抗原的消化道肿瘤细胞提取RNA及gDNA,RT-PCR扩增Cosmc、T-synthase cDNA,PCR扩增DNA,测序确定突变位点;通过向肿瘤细胞转染野生型WtCosmc,明确Cosmc基因突变与T-Synthase活性、肿瘤抗原表达及肿瘤转归的关系;结果将对阐明肿瘤的发病机制带来突破,为肿瘤诊断治疗及预防提供依据。

分子伴侣(Cosmc)基因突变与某些肿瘤细胞T-synthase活性降低、Tn抗原表达有关，但在消化道肿瘤Tn抗原表达及其预后中的作用迄今仍然未知。通过流式细胞仪、免疫磁珠分选、PCR、PT-PCR克隆测序、基因转染等方法对Cosmc基因突变与消化道肿瘤转归及Tn抗原表达之间的关系进行了研究，结果如下： .1. 胃癌组织中Tn抗原阳性率为61.43%，结直肠癌组织中Tn抗原阳性率为57.14%。TNM-Ⅲ、TNM-Ⅳ期Tn抗原阳性率均高于TNM-Ⅰ、TNM-Ⅱ期；核增殖抗原Ki-67、Tn抗原的表达水平及阳性率均与肿瘤分化程度有关，中低分化组明显高于高分化组。与Tn-肿瘤组织相比，Tn+肿瘤组织中IL-4、IL-10含量增高，IL-12、IFN-γ含量明降低。.2. 建立了免疫磁珠分选消化道肿瘤Tn+、Tn- 细胞及荧光检测T-synthase活性的可靠方法；证实Tn+细胞与Tn- 细胞之间T-Synthase mRNA转录水平无明显差异；但Tn+细胞T-synthase的活性明显降低。.3. 原代Tn+细胞增殖能力高于Tn- 细胞；单克隆抗体(anti-Tn,IgM)可抑制其增殖能力，亦可增强补体杀伤效应。将构建的野生型Cosmc质粒转染Tn+肿瘤细胞后T-Synthase活性升高，Tn抗原表达降低或消失，细胞增殖能力明显下降。.4. 女性Tn+肿瘤细胞Cosmc基因编码区共发现6个位点为等位基因嵌合体，其中2个(70A/G,rs146307271;393A/T,rs17261572)为基因bank报告的SNP位点，另4个(33T/G,69T/A,667C/T,899G/T)未见报道；393A/T、899G/T频率较高。非编码区共发现8个等位基因嵌合体，其中3个(+1250C/A,rs58045522;+1258C/T, rs5910940; +1337A/G,rs17327439)为基因bank报告的SNP位点，LOH频率较高，另5个未见报道；Tn+肿瘤细胞中至少存在1个无活性等位基因残留或杂合缺失、T-Synthase活性丧失。.5. Tn+肿瘤细胞中Cosmc基因编码区、非编码区发现多个基因突变位点，有些突变位点与等位基因嵌合体所在位点一致。编码区点突变致编码氨基酸改变或终止密码子过早出现；启动子甲基化及非编码区突变也也可影响Cosmc转录。