Tim-3/Tim-3L信号通路在幽门螺杆菌感染免疫致病和免疫防治中的作用

我们的前期研究已证实Th反应、TLR4信号通路和Treg的变化在Hp致病和疫苗免疫保护中起重要作用，但是这些变化发生的机制尚不清楚，为何Hp感染和疫苗接种后上述因素会发生不同的变化而分别引起免疫致病和免疫保护不同的结果，它们的调控机制尚不清楚。Tim-3/Tim-3L是新发现的调节Th反应的核心环节，并且与TLR4信号通路和Treg密切相关。然而Tim-3/Tim-3L在Hp致病和疫苗免疫保护中的作用国内外尚未见报道。为此，本项目拟研究Hp感染和疫苗接种后Tim-3/Tim-3L的变化，并以Tim-3/Tim-3L通路为干预靶点，分别观察阻断和促进Tim-3/Tim-3L通路对Hp感染和疫苗接种小鼠Th反应、TLR4信号通路及Treg的影响，及其与Hp致病和疫苗免疫保护作用的关系，从一新的角度探讨Hp致病机制和疫苗的保护机制，为Hp疫苗和免疫调节剂研制的策略提供新的理论和实验依据。

按计划完成课题，主要进行了已下三方面的研究：①Tim-3抗体阻断对H. pylori感染免疫致病和疫苗免疫保护作用影响及机制；②Tim-3配体Galectin-9对H. pylori感染免疫致病和疫苗免疫保护作用影响及机制；③阻断Tim-3信号通路对H. pylori刺激的淋巴细胞的影响。得出以下结论：①Tim-3阻断可提高H. pylori疫苗的免疫保护率，但并不降低H. pylori自然感染小鼠胃黏膜内H. pylori定植密度；②Tim-3阻断可加剧H. pylori疫苗接种小鼠和H. pylori感染小鼠胃黏膜炎症程度；③Tim-3阻断可上调TLR4、MyD88的表达和促进NF-κB活化，降低CD4+CD25+Foxp3+Treg的数量，增强Th1免疫反应，抑制Th2免疫反应，这可能是它增强H .pylori疫苗的免疫保护作用的机制，但并不影响H. pylori自然感染小鼠胃黏膜内H. pylori定植密度；④Tim-3阻断对H. pylori疫苗接种小鼠和H. pylori感染小鼠免疫反应调控最终导致的结局不同，前者在加剧炎症反应的同时，有利于H. pylori的清除，后者加剧炎症反应，却不能清除H. pylori感染；⑤Tim-3配体Galectin-9可降低H. pylori疫苗的免疫保护率，但对自然感染小鼠胃黏膜内H. pylori定植密度无影响；⑥Tim-3配体Galectin-9可减轻H. pylori疫苗接种小鼠和H. pylori感染小鼠胃黏膜炎症程度；⑦Tim-3配体Galectin-9可下调TLR4、MyD88的表达和抑制NF-κB活化，增加CD4+CD25+Foxp3+Treg的数量，抑制Th1免疫反应，这可能是它可减轻H. pylori疫苗接种小鼠和H. pylori感染小鼠胃黏膜炎症的作用机制；⑧以壳聚糖微球为佐剂的H. pylori疫苗与传统的佐剂CT为佐剂的H. pylori疫苗对H. pylori感染具有同样的免疫保护作用；⑨在体外阻断小鼠的脾淋巴细胞Tim-3信号通路，可上调TLR4、MyD88的表达，下调Foxp3的表达，增强Th1免疫反应，抑制Th2免疫反应；而激活Tim-3信号通路，可下调TLR4、MyD88的表达，上调Foxp3的表达，抑制Th1免疫反应，增强Th2免疫反应。