乳酸杆菌表面蛋白活性片段调控microRNA-122a抑制Zonulin表达抗肠上皮损伤的分子机制研究

On the basis of our previous discovery of mannose receptor (MR), our study is to further investigate the molecular mechanism of MR in the anti-injury process of intestinal epithelial cells (IECs) from the four level, including cell, organ, animal, and human sample. After establishment of the IEC special microRNA-122a (miR-122a) knock-out mice and the primary colonic cell culture, the key point molecular of miR-122a and its target protein epidermal growth factor receptor is to be verified using the methods of organ culture and laser capture microdissection; the molecular mechanism is also determined by intestinal special vector and abdominal intestinal injection using the enteritis model of IEC special miR-122a knock-out mice induced by dextran sulfate sodium and oxazolone, and the mRNA combining sites of miR-122a was determined by argonaute high-throughput sequencing of RNA isolated by crosslinking immunoprecipitation; the efficient molecular of prediction and prognosis are screened by the clinical blood serum and tissues. Our study can finish the link between lactobacillus and miRNA on the basis of our previous study, and create a relatively perfect pathway form lactobacillus to intestinal barrier protection, which contribute to the molecular mechanism of intestinal protection by lactobacillus surface layer protein, may provide early diagnostic evidence of clinical intestinal barrier dysfunction, and can be expect to the clinical use of prevention and treatment of difficult and severe intestinal dysfunction.

本课题组前期研究发现乳酸杆菌表面活性成分MIMP具有肠屏障保护作用，而最新研究发现miR-122a和Zonulin在肠屏障抗损伤过程中起着重要的作用，本课题将在此基础上，拟从细胞→器官→动物→人四个水平探索肠上皮细胞抗损伤的分子机制。首先，建立microRNA-122a肠上皮特异性敲除小鼠和转基因小鼠，并进行肠上皮原代细胞培养，检测MIMP发挥作用的分子机制，验证其关键节点miR-122a及其下游分子Zonulin，并通过离体器官培养和激光捕获微切割法进行体外验证，运用小鼠肠道特异性载体和经腹肠腔注射法进行体内验证；高通量测序-交联免疫法检测目标RNA结合位点；临床组织和血清标本验证MIMP发挥作用的分子机制。本课题有望进一步完善从乳酸杆菌到肠屏障保护较为完美的调控通路，进一步明确MIMP保护肠屏障的分子机制，并促进MIMP的临床转化及开发新药，可望用于临床疑难及重症肠屏障功能障碍的防治。

本课题组前期研究发现乳酸杆菌表面活性成分MIMP 具有肠屏障保护作用，最新研究发现miR-122a 和Zonulin 在肠屏障抗损伤过程中起着重要的作用，本课题在此基础上，从细胞→器官→动物→人四个水平探索肠上皮细胞抗损伤的分子机制。首先，建立microRNA-122a 肠上皮特异性敲除小鼠和转基因小鼠，并进行肠上皮原代细胞培养，检测MIMP 发挥作用的分子机制，验证其关键节点miR-122a 及其下游分子Zonulin，临床组织和血清标本验证miR-122a发挥作用的分子机制。. 本课题成果进一步完善了从乳酸杆菌到肠屏障保护较为完整的调控通路，进一步明确MIMP 保护肠屏障的分子机制，并促进MIMP 的临床转化及开发新药，可望用于临床疑难及重症肠屏障功能障碍的防治。. 研究工作进展顺利，基本按照原工作计划完成。在此基金的支持下，课题组共发表SCI论文8篇，专利8项，其中发明专利2项，实用新型6项，获得黎介寿肠道屏障研究专项基金优秀研究课题奖一项，并进一步获得广东省自然科学基金重大基础研究培育一项（2014A030308004），广东省高层次人才特殊支持计划一项（2015TQ01R334）。详见“研究成果”部分。此外，项目负责人刘志华已晋升为研究员，外科学博士生导师，博士后导师，并成为中国医师协会外科医师分会加速康复外科专家委员会委员，中华医学会肠外肠内营养学分会肠道微生态与临床营养协作组委员，中国胃肠外科卓异青年联盟委员，广东省高等学校“千百十”人才校级培养对象，广东省自然科学基金评审专家。课题组成员康亮教授，黄美近教授已晋升为主任医师，彭慧教授已晋升为副主任医师。黄美近教授当选中国抗癌协会康复会胃肠肿瘤分会主任委员，康亮当选CSTa主任委员。培养硕士研究生4名，协助培养博士研究生2名，青年医师，进修医师若干名。