胃癌细胞中REIC蛋白作用靶分子及信号传导通路研究

胃癌是世界上严重威胁人类健康的最常见恶性肿瘤之一，但其发生和演进的分子机制仍不清楚。本项目组发现REIC蛋白表达与胃癌肿块大小、淋巴结转移和UICC临床病理分期呈负相关，REIC蛋白表达可逆转胃癌恶性细胞表型。本研究拟观察重组REIC蛋白对胃癌细胞核质比、增殖、细胞周期、凋亡、迁徙、侵袭、片状和侵袭伪足的影响，揭示胃癌细胞中REIC直接作用的靶蛋白，分析REIC表达增强后发生的核蛋白变化及对细胞周期和凋亡相关蛋白的调节，研究REIC蛋白表达增强或减弱后细胞伪足内聚集蛋白的变化及相关影响因素。本研究项目通过分析分泌型和细胞浆型REIC生物学作用及结合分子靶点，构建REIC信号网络可以丰富胃癌细胞中REIC基因的肿瘤抑制作用及分子机理的探讨，为胃癌早期诊断和晚期基因治疗提供一个新的分子靶点。

本项目研究基本达到预期目标。发现REIC 蛋白表达与胃癌肿块大小、淋巴结转移和UICC 临床病理分期呈负相关，REIC蛋白表达可逆转胃癌恶性细胞表型。本项目组检测了REIC高表达胃癌细胞的迁徙和侵袭能力，发现REIC可以抑制胃癌细胞的迁徙和侵袭。我们用重组REIC蛋白处理AGS细胞，发现其可降低AGS和BGC823细胞的增殖能力，而对血管内皮细胞ECV304和HUVECs2620增殖具有促进作用。重组REIC蛋白可诱导AGS细胞G1期阻滞，REIC抗体可阻断REIC过表达对AGS细胞增殖和G1诱导作用。重组REIC蛋白可以诱导细胞发生凋亡，REIC抗体可以阻断REIC过表达的凋亡诱导作用。IDU和CIDU染色结果表明，REIC过表达和REIC蛋白处理可以降低细胞S期DNA复制我们重新将MGC-803细胞REIC过表达后接种到裸鼠体内，大体、解剖和CT结果显示REIC可以抑制胃癌细胞体内生长的作用。我们利用基因重组和显微注射制备了K19-cre工具鼠，经过遗传学鉴定结果阳性，实时PCR结果证实胃粘膜表达水平很高，Western blot也证实重组酶cre的存在，半乳糖苷酶染色鉴定具有高重组酶活性。此外，我们从北京军科院引进了Capn8-cre（胃粘膜顶细胞）和ATP4B-cre（胃粘膜壁细胞）工具鼠，从日本冈山大学回赠了REIC条件敲除鼠，经过交配我们已经获得了cre- REIC-/-鼠，胃粘膜改变正在观察中，数据正在处理。本研究揭示了异常REIC表达在胃癌发生和演进中作用，丰富了胃癌细胞中REIC基因的肿瘤抑制作用及分子机理，为胃癌早期诊断和晚期基因治疗提供一个新的分子靶点，对提高胃癌患者生存率和生存质量具有巨大促进作用。