基于"补肾化痰”法探讨地黄饮子对双转基因痴呆小鼠脑内神经递质的PK-PD及机制研究

Kidney-essence weak, phelegm is one of the major pathogenesis of AD,and replenishing kidney-essence,Eliminating phlegm therapy is operative on treating AD.The large number of pre clinical and experimental studies indicate that Dihuangyinzi through multi points on numbers of neurodegenerative diseases had better effect.Results show that the prescription of Dihuang yinzi can protect nerve cells,inhibit the deposition of Aβ effectively and cut down the level of phosphorylated tau.But the relationship between neurotransmitters and drugs has not been elucidated.Therefore, we proposed a work hypothesis: Dihuang Yinzi can affect neurotransmitters. In this study, we analyzed the relationship between the metabolism and effects of Dihuang Yinzi in the brain from the perspective of neurotransmitters.we use the international advanced sampling technology and detection means ,as MD, UPLC-Q/TOF-MS, MSE mass spectrometry data acquisition model, RT-PCR, Western blot, laser confocal technology, evaluate the effect of Dihuangyinzi in the brain of APP/PS1 mice in combination with neurotransmitterstransfer binding, transmission, and survival status of brain cells .Analysis of the mechanism of Dihuangyinzi on neurotransmitter.Analysis of Dihuangyinzi under the condition of AD in the brain of concentration efficacy time mechanism.Reveal mechanism of Dihuangynzi on brain neurotransmitter.The system described Dihuangyinzi in the neurotransmitter mechanism.Demonstrate the scientific connotation of the method replenishing kidney-essence,eliminating phlegm therapy is operative on treating AD.Provide the basis for the clinical application of the rule of law, and lay the foundation for the further development.

阿尔茨海默病的中医主要病机之一为“肾精亏虚、痰浊阻窍”，课题组运用“补肾填精、化痰开窍”法依托经典方剂地黄饮子防治AD取得了良好的临床效果，同时通过体内外实验表明地黄饮子对神经细胞具有保护作用，能够抑制Aβ沉积、降低tau蛋白磷酸化水平，而神经递质与药物之间的关系尚未阐述。因此提出本课题工作假说：地黄饮子能够影响神经递质。本课题从神经递质的角度对地黄饮子在脑内的代谢与效应关系进行深入分析，利用国际前沿的MD、UPLC-Q/TOF-MS技术、MSE质谱数据采集模式，运用PCR、western blot、激光共聚焦等生物技术，对地黄饮子影响APP/PS1双转基因小鼠脑内神经递质进行评价，分析其干预机制。系统阐明依托这一治法的地黄饮子在双转基因小鼠脑内的浓度-效应-时间-机制的关系，从而阐述“补肾填精、化痰开窍”法的科学内涵，为这一治法的临床应用提供依据，为进一步开发地黄饮子新药奠定基础。

通过本项目基本明确了地黄饮子干预下对APP/PS1双转基因小鼠脑内神经递质的PK-PD影响及机制情况。.地黄饮子对APP/PS1双转基因小鼠脑内神经递质的PK-PD研究显示，地黄饮子能够在给药一周后提升APP/PS1小鼠脑组织细胞外液Ach的活性，在给药两周后逐渐降低APP/PS1小鼠脑组织细胞外液Glu浓度。地黄饮子干预下APP/PS1小鼠海马内乙酰胆碱与谷氨酸的浓度的大小与地黄饮子有效成分——五味子醇甲的浓度有密切的联系。随着药物浓度的升高，乙酰胆碱的浓度也在升高，而谷氨酸浓度有下降趋势。且在给药两周后乙酰胆碱浓度变化明显，谷氨酸的浓度变化有延迟性，且在第二周有所上升，但在第三四周有呈现下降趋势。说明在地黄饮子作用下，APP/PS1双转基因小鼠脑内神经递质出现与时间正相关的神经递质的浓度变化，且在APP/PS1双转基因小鼠脑内检测到与地黄饮子有效成分——五味子醇甲的浓度呈正相关。证明了神经递质的变化与药物的相关性。并且对效应的机制进行深入研究，从神经递质及其受体、神经递质存在空间相关的神经突触及星形胶质细胞进行挖掘，锁定神经递质相关联的功能累及关系。结果显示地黄饮子能够增强乙酰胆碱受体nAChRα7的活性，提高谷氨酸受体NR2A含量；增强APP/PS1小鼠海马组织内Syn1、PSD95的蛋白表达水平、强化神经递质传导增强乙酰胆碱的活性；另一方面通过降低APP/PS1小鼠海马组织S100B、GFAP含量，通过抑制反应性星形胶质细胞增生来增强Glu的重吸收，降低谷氨酸毒性。说明地黄饮子可能通过增强乙酰胆碱极其受体的活性，同时改善神经突触的活力，同时在周围维护谷氨酸受体NR2A的功能并抑制反应性星形胶质细胞增生，从而减少细胞外Glu浓度进而减轻谷氨酸兴奋性毒性来延缓AD进展。.本课题从地黄饮子的时间-药物-药效-机制角度探索，证实地黄饮子防治阿尔茨海默病的有效性，阐述“补肾填精、化痰开窍”法防治AD的科学依据，为其他神经退行性疾病的防治提供借鉴和参考，也为防治AD的经典方剂新药开发、阐述药效物质基础及作用规律，探讨其作用机制，研究奠定基础。