LRP6靶向Rab7调控绒毛外滋养细胞自噬流在子痫前期发病机制中的作用研究

Preeclampsia (PE) is a serious pregnant complication. Its specific molecular mechanism is unclear, and declined invasion of extravillous trophoblast (EVT) is key point. Blocked autophagic flux will result in cell function loss even apoptosis. Inhibition of Rab7 can cause autophagic flux to be blocked; Furthermore, c-myc, the target gene of Wnt/β-catenin pathway, directly participates in the regulation of Rab7. Our preliminary study found that down-regulation of LRP6 inhibited Wnt/β-catenin pathway, then resulted in impaired EVT function. So we provide a hypothesis: “Down-regulation of LRP6 in EVT inhibits Wnt/β-catenin pathway, which suppresses expression of Rab7; the latter causes EVT autophagic flux to be blocked, eventually brings about damage in EVT function, and the onset of PE.” This project aims to discuss the role of LRP6 in targeting Rab7 and regulating EVT autophagic flux, and expound the relationship between the blocked autophagic flux and declined invasion of EVT and subsequently the onset of PE, on the basis of clinical samples, cellular and animal models, using techniques including molecular biology, cellular biology and gene engineering. We wish the results can provide some news of PE immunological pathogenesis and therapeutic targets.

子痫前期（PE）严重威害母儿安全，绒毛外滋养细胞（EVT）侵袭力下降是该病发生的关键环节，具体分子机制不清。研究证实，自噬流受阻可导致细胞功能损伤甚至死亡；抑制Rab7表达可造成自噬流受阻；而Wnt/β-catenin通路靶基因c-Myc直接参与调控Rab7表达。我们研究发现LRP6表达下调，可抑制Wnt/β-catenin通路活性，导致EVT功能受损。因而推测：EVT中LRP6表达下调，通过Wnt/β-catenin通路抑制Rab7表达，造成自噬流受阻，进而导致EVT侵袭力下降和PE发生。项目拟运用分子生物学、细胞生物学和基因工程等手段，在临床标本实验、细胞模型实验以及动物模型实验三个层次展开研究，深入探讨EVT中LRP6通过Wnt/β-catenin通路靶向Rab7对自噬流的调控作用，并阐明其与EVT侵袭力下降和PE发病的关系。为进一步认识PE发病机制及制定防治策略提供新的理论依据。

【项目背景】子痫前期是妊娠20周后出现，以高血压和蛋白尿为主要临床表现，妊娠期特发性疾病。但其发病机制复杂，目前普遍认为绒毛外滋养细胞侵袭力下降是其主要原因之一。因而，近年来对PE发病机制的研究多聚焦于导致EVT功能受损的通路研究。LRP6是LRP家族成员之一，是Wnt/β-catenin通路中的重要分子，对于维持通路正常活性至关重要，但其对滋养细胞功能的影响及在子痫前期发病中的作用尚不清楚。.【研究内容】LRP6通过Wnt/β-catenin信号通路影响滋养细胞的侵袭的具体机制。.【重要结果】（1）LRP6敲低表达可抑制Wnt/β-catenin信号通路活性，并进一步抑制滋养细胞的增殖，迁移侵袭和管腔形成、降低滋养细胞的MMPs，PIGF和VEGF的表达。提示，LRP6可通过Wnt/β-catenin信号通路调节滋养细胞功能，影响母体螺旋动脉的重塑。（2）滋养细胞在缺氧/复氧（H/R）培养条件下，LRP6的过表达可通过激活自噬来增加细胞增殖，迁移和生长能力。此外，LRP6过表达可通过Wnt/β-catenin通路上调Rab7表达，进而导致自噬流增加。说明，LRP6可通过Wnt/β-catenin通路调节Rab7介导的自噬，进而调控滋养细胞的功能。（3）过表达Hsa-miR-513c-5p可抑制HTR-8/SVneo细胞LRP6的表达和HTR-8/SVneo细胞的增殖、侵袭迁移和凋亡。说明Hsa-miR-513c-5p可通过调节LRP6表达参与调控滋养细胞的功能。.【关键数据】滋养细胞中，Hsa-miR-513c-5p可调节LRP6表达水平，而LRP6可通过Wnt/β-catenin通路调节Rab7介导的自噬，进而调控滋养细胞的功能，影响母体螺旋动脉的重塑。.【科学意义】项目为进一步认识PE发病机制提供了新的理论依据。证实LRP6可作为子痫前期的重要治疗靶点，为子痫前期的临床治疗探索了新的途径。