基于PI3K/Akt/eNOS通路探索祛瘀化痰解毒法中药复方治疗慢性肾病血管病变的分子机制

Cardiovascular disease is the major cause of death in chronic kidney disease（CKD）patient. Elevation of homocysteine(Hcy) was associated with increased risk of cardiovascular events in CKD. The role of Hcy in CKD vasculopathy is still not clear. Hcy vascular injury is thought to be linked to PI3K/Akt/eNOS signal pathway. Meanwhile,NO signal pathway was believed involved in CKD blood vessel damage. Shuang Shen Xiong Lian Granule(SSXL) , TCM Compound Formula which have the effect of remove blood stasis and dissipate phlegm and detoxification , have a positive effectnot only on blood lipid and Hcy metabolism but also on cardiovascular . Our hypothesis is that PI3K/Akt/eNOS signal pathway involved in the hyperhomocysteinemia CKD vasculopathy.The vascular protection effects of SSXL are mainly attributed to the activation of PI3K/Akt/eNOS signaling pathway. To test this hypothesis, nephrectomized rat feeding methionine-enriched diet would be used . BP, contraction and relaxation on isolated vessel ring, and protein expression of this signal pathway would be tested.Activation of PI3K/Akt/eNOS signaling pathway is also investigate in CKD rat. The role of PI3K/Akt/eNOS signaling pathway in the vascular protection mechanism of SSXL will be observed.

心血管疾病是慢性肾病患者主要的死亡原因，高同型半胱氨酸（Hcy）会增加慢性肾病患者心血管事件。Hcy在慢性肾病血管病变中的作用目前尚不清楚。Hcy所致的血管损伤与PI3K/Akt/eNOS通路改变有关，同时NO信号通路的改变被认为是慢性肾病血管功能异常的重要环节。祛瘀化痰，解毒通脉功效中药复方双参芎连颗粒对高血脂、高同型半胱氨酸血症的血管病变及冠心病均有明显的改善作用。本课题提出假说：PI3K/ Akt/ eNOS通路可能参与Hcy升高的慢性肾病血管病变，祛瘀化痰解毒法中药复方双参芎连颗粒可能通过调节该信号通路发挥改善慢性肾病血管病变。采用高同型半胱氨酸慢性肾病血管病变大鼠模型，观察模型血压、离体血管舒张与收缩反应、血管组织PI3K/Akt/eNOS通路相关蛋白表达以及血浆总NO含量。观察激活该通路对慢性肾病血管病变的影响，同时观察双参芎连颗粒对慢性肾病血管病变该通路干预作用。

慢性肾病是全球性的健康问题，高同型半胱氨酸血症是近年来发现的心血管疾病发病的独立危险因子。然而，同型半胱氨酸在慢性肾病患者的心血管病变的具体机理仍不清楚。中医认为慢性肾病与气虚血瘀、痰浊邪毒密切相关，本课基于PI3K/Akt/eNOS通路探索了祛瘀化痰解毒法中药复方——双参芎连颗粒治疗慢性肾病血管病变的分子机制。研究结果显示，大鼠喂养高蛋氨酸饲料结合5/6肾摘除可以建立慢性肾病高同型半胱氨酸血症大鼠模型，该模型表现为血压的渐进性升高，主动脉血管的内皮依赖性及非依赖型舒张均受到明显的损伤。本研究中复合模型动物的血浆NO含量和血管组织eNOS活性与假手术比较未见明显差异，血管组织的p-Ser1177结果表明复合模型组eNOS表达处于上调状态。在慢性血管性病变过程中，eNOS具有重要的代偿调节作用，慢性肾病高同型半胱氨酸血症是一种复杂的疾病，存在着慢性的血管病变，动物机体在发病的过程中可能代偿性地促进了血管eNOS的表达进而促进血液循环状态稳定。然而作为机体的代偿的能力是有一定限度的，并不能进一步的平衡慢性肾病和高同型半胱氨酸血症所造成的损伤。当给予了PI3K激活剂IGF-1后，模型组动物的PI3K/AKT/eNOS信号通路表达上调，同时动物血压的升高也在一定程度上得到控制，其作用可能与调节内皮依赖及非内皮依赖的的血管舒张有关，上述的对血管功能的改善会被PI3K/AKT抑制剂API-2和eNOS抑制剂L-NAME在一定程度抑制。当给复合模型给予双参芎连颗粒干预后，动物的主动脉血管组织的PI3K/AKT/eNOS信号通路表达明显上调，双参芎连颗粒可以明显的降低模型动物血压的上升，改善内皮依赖和非内皮依赖性血管舒张作用，增加血清NO含量和eNOS活性，对血管形态也有一定的改善。祛瘀化痰解毒法中药复方参芎连颗粒可以明显改善慢性肾病高同型半胱氨酸血症血清肌酐、尿素氮水平，降低血清高同型半胱氨酸及蛋氨酸含量，降低血清总胆固醇及低密度脂蛋白含量，调节血压异常，改善血管内皮依赖性和非内皮依赖性血管舒张，其作用可能与上调PI3K/AKT/eNOS信号通路表达有一定关系。