Kallistatin调节宫颈癌细胞EMT抑制宫颈癌转移的作用及机制研究

Cervical cancer is one of the most common malignant tumors in women worldwide. Distance metastasis is the main cause of treatment failure. Previous studies including ours have proved that Kallikrein-binding protein Kallistatin could inhibit angiogenesis in tumors. Our preliminary data showed that plasma Kallistatin was reduced in cervical cancer patients with lymph node metastasis. Furthermore, Kallistatin suppressed metastasis of cervical cancer cell, up-regulated the expression of E-cadherin and down-regulated the expression of N-cadherin and Vimentin. These results strongly suggest that Kallistatin may inhibit cervical cancer metastasis via regulating EMT. This project aims to unveil the role of Kallistatin in cervical cancer metastasis by generating spontaneous lymph node metastasis mice model and observing the change of the quantity and volume of popliteal lymph node. And also aims to explore the role of Notch1/PI3K/Akt/GSK3β and Wnt signaling pathways in Kallistatin-modulated cervical cancer EMT. This project will clarify the molecular mechanism by which Kallistatin inhibits cervical cancer cell metastasis and EMT, thus providing a new drug candidate for the treatment of cervical cancer metastasis.

宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一，远处转移是其治疗失败的主要原因。包括我们在内的研究已证实激肽释放酶结合蛋白Kallistatin具有抑制肿瘤血管新生的作用，但Kallistatin对肿瘤转移的调节尚待深入研究。前期研究发现宫颈癌淋巴结转移患者血浆中Kallistatin水平降低；Kallistatin抑制宫颈癌细胞迁移，上调E-cadherin、下调N-cadherin和Vimentin。提示Kallistatin可通过调节宫颈癌细胞EMT抑制宫颈癌转移。本项目拟建立自发性淋巴结转移动物模型，观察腘窝淋巴结数目和体积的变化，明确Kallistatin对宫颈癌转移的调控作用；并探讨Notch1/PI3K/Akt/GSK3β和Wnt信号通路在Kallistatin调节宫颈癌EMT中的作用。旨在阐明Kallistatin抑制宫颈癌转移和EMT的作用和分子机制，为治疗宫颈癌转移提供新的候选药物。

Kallistatin作为一种内源性丝氨酸蛋白酶抑制剂参与了高血压、变态反应及炎症等病理生理过程。以往的研究显示在肥胖、败血症、肝炎以及肿瘤病人血浆中 Kallistatin的水平显著降低，提示Kallistatin对这些疾病可能具有治疗作用。已有研究证实Kallistatin可通过多种方式发挥其抗肿瘤的作用。但至今仍无文献报道 Kallistatin可以通过调控肿瘤细胞EMT抑制肿瘤的转移。为此本项目设计相关内容并取得以下重要结果：1.发现相比于人宫颈癌癌旁组织，随着宫颈癌发生淋巴结转移，组织中Kallistatin和E-cadherin表达逐渐下降，Vimentin表达逐渐增加；并且Kallistatin与E-cadherin的表达呈正相关（r=0.422， p<0.05），与Vimentin的表达呈负相关（r=-0.445, p<0.05）；ELISA的结果则显示，发生淋巴结转移的宫颈癌患者血浆中 Kallistatin 水平比未发生淋巴结转移的宫颈癌患者低。以上结果提示Kallistatin表达水平与宫颈癌细胞的EMT及宫颈癌转移存在相关性。2.此外，我们构建了裸鼠足垫模型，尾静脉注射Kallistatin腺病毒，发现Kallistatin病毒组腘窝淋巴结处的肿瘤大小和重量显著小于对照病毒组；细胞实验的结果显示Kallistatin抑制宫颈癌细胞的迁移。以上结果表明Kallistatin具有抑制宫颈癌淋巴结转移的作用。3.最后在机制上，我们发现Kallistatin调节宫颈癌细胞EMT分子标志物的表达，且由Wnt/β-catenin信号通路而非PI3K/Akt信号通路介导。本项目明确了Kallistatin调节宫颈癌细胞EMT抑制宫颈癌转移的作用，并阐明了其分子机制，为治疗宫颈癌转移提供了新的候选药物和有效干预靶点。