糖蛋白基因的重排及突变对狂犬病毒致病性及免疫原性的影响

狂犬病病毒基因结构为3'-N-P-M-G-L-5'，本研究拟以含有狂犬病毒弱毒株全基因组cDNA的质粒为材料，采用分子生物学技术将其糖蛋白基因（G）由原来的第四位重排至第二位，构建得到G基因重新定位的全长基因组质粒。在此基础上对G基因333、242位氨基酸进行点突变、采用已建立的反向遗传操作技术，将重排和突变的全长基因组cDNA与分别含有狂犬病病毒核蛋白基因N、磷酸化蛋白基因P和大转录酶蛋白基因L的辅助质粒以一定比例共转染BHK-21细胞系，培养数天后用荧光素标记的抗N蛋白抗抗体进行免疫荧光检测，以确定G基因重新定位和突变的病毒获得成功拯救。在对该病毒进行成功拯救后，进一步研究其在细胞中的增殖效率、G蛋白的表达量、对小鼠的毒力及免疫原性，以探讨G基因的重排及突变对狂犬病病毒致病性、免疫原性的的影响，为研制高效、安全具自主知识产权的狂犬病病毒基因工程疫苗奠定基础。