prfA基因突变对单核细胞增生性李氏杆菌毒力及免疫原性的影响

单核细胞增生性李氏杆菌（Listeria monocytogenes，LM）是一种重要的人兽共患病原菌，能引起多种动物发病。同时，作为四大食源性细菌之一，该菌能污染肉、奶制品等动物性食品而引起食物中毒，对人类的健康构成极大的威胁。LM LIPI-1致病岛编码6个毒力因子，它们在LM感染、扩散和致病过程中发挥重要作用。本项目拟运用基因工程手段对LM强毒株LIPI-1致病岛中毒力因子调控蛋白-正调节因子（prfA）的编码基因进行缺失突变，利用同源重组技术构建能表达绿色荧光蛋白（EGFP）的ΔprfA基因突变菌，探讨prfA基因突变对突变菌毒力和免疫原性的影响，旨在为动物李氏杆菌活疫苗载体及其分子标记疫苗的研发奠定基础。

单核细胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes，LM）是一种对动物和人类危害较大的人兽共患胞内寄生菌。LM致病岛1（LIPI-1）编码的6个毒力因子在其感染、扩散和致病过程中发挥重要作用。本项目运用基因工程手段对LM强毒株LIPI-1致病岛中毒力因子调控蛋白-正调节因子（prfA）的编码基因进行缺失突变，利用同源重组技术构建能表达绿色荧光蛋白（gfp）的ΔprfA基因突变株，分析了ΔprfA基因突变对LM毒力和免疫原性的影响。结果表明，ΔprfA突变株与强毒株相比具有相似的体外生长特性，但溶血素基因（hly）的转录水平降低；LD50显著升高，对小鼠的毒力显著减弱。动物免疫试验结果表明，LM ΔprfA突变株具有较强的免疫原性，对强毒攻毒的保护率可达90 %，要明显高于灭活苗（保护率为35 %）。本研究提示，prfA基因突变后LM毒力明显下降，但仍保持较好的免疫原性。在此基础上，本研究构建了对prfA基因调控的SigmaB和RsbV基因缺失突变株，证实这两个基因缺失后LIPI-1致病岛的大部分毒力基因转录水平均降低，致病力明显下降，环境应激耐受力降低。本研究完成了合同书中的各项任务，达到了研究预期目标，为 LM活疫苗载体和分子标记疫苗的研制奠定了理论基础。