广西黄曲霉毒素-乙型肝炎病毒双暴露原发性肝细胞癌亚型的全外显子多态性特征筛查及其功能鉴定

Hepaocellular carcinoma (HCC) ranks the first mortality of malignant tumors in the Guangxi Zhuang Autonomous Region, where aflatoxin B1 (AFB1) exposure in foods and hepatitis B virus (HBV) infection are important risk factors for the pandemic of HCC. We conducted candidate-gene-screening in our prior study among AFB1-HBV exposed population in identifying genetic polymorphisms influencing bio-effects of AFB1 exposure. We found that significant signals clustered at the region involving chemical metabolism, DNA damage repair, tumor suppressor genes, growth factors and membrane protein genes. Based on these findings, we are going to scan the whole exome for characteristic polymorphisms in the sub-type of AFB1-HBV exposed HCC patients, and validate its biological function in in vitro studies. Taking advantage of AFB1-exposure in the Guangxi region, the investigation of genetic susceptibility relevant to environmental carcinogen exposure might help understanding of the etiology role of gene-environment interaction in carcinogenesis and the development of active prevention strategy in high-risk population in HCC pandemic areas.

原发性肝细胞癌列广西壮族自治区肿瘤死因谱第一位；食物黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1, AFB1）污染及乙型肝炎病毒（hepatitis B virus, HBV）感染是当地肝癌高发的重要因素。我们的前期研究采用候选基因扫描策略调查广西AFB1-HBV双暴露人群中影响环境致癌物AFB1暴露生物效应的遗传多态性，结果发现达到统计学显著性的基因型信号分布在化学物代谢、DNA损伤修复、肿瘤抑制基因、生长因子、膜蛋白等基因区域。在此基础上，本研究拟进一步采用全外显子多态性扫描策略，调查广西AFB1-HBV双暴露肝癌亚型人群中的全外显子多态性特征，并对其生物学功能进行针对性体外实验验证。其意义在于，利用广西AFB1高暴露的特殊环境背景探索我国与环境致癌物暴露相关的肝癌遗传易感性，有助于针对肝癌高发地区高危人群开发积极的一级和二级预防策略，对探讨肿瘤发病中的环境－基因相互作用机制具有普遍性意义

HCC的发生是外因与内因共同作用，经过多步骤，涉及多基因的复杂过程，针对广西地区HCC发病的主要危险因素，外因是HBV、环境致癌物AFB1的暴露，内因是个体遗传背景差异 。 HCC的外因短时间内难以改善；而国内外仍缺乏针对内因的研究。针对上述研究的空白，本项目采用全外显子多态性扫描策略，调查广西AFB1-HBV双暴露原发性肝癌亚型人群中的全外显子多态性特征，并对其生物学功能进行针对性体外实验验证。在本项目支持下我们进行了大量的研究工作，主要发现如下：1、黄曲霉菌产毒日比例并不能有效和准确的反应黄曲霉毒素暴露程度。 2、TP53基因第249位密码子突变与HBV相关性HCC患者术后2年内复发存在显著关联。3、术前血清AFP水平 > 400 ng/mL+TP53 基因第249位密码子突变亚组患者的临床预后更差。4、在TP53基因第249位密码子突变分层患者中，根治性切除、术后TACE治疗、术后抗病毒治疗并不能显著延长患者术后2年内的无瘤生存期。5、我们通过GWAS策略，初步鉴定出rs9930984、rs75218075、rs8022091位点与TP53基因第249位密码子突变存在显著关联。6、rs9930984位点的基因型与ADAMTS18基因mRNA表达量在癌旁组织中存在显著关联（P = 0.0028），GT基因型的表达量高于TT基因型的表达量，但其在癌组织中差异不存在显著性。7、MHCC-97H、HepG2、HL-7702细胞株在1, 2μM浓度的AFB1干预下，ADAMTS18基因沉默和过表达对AFB1致TP53基因第249位密码子突变并未产生影响。这提示我们以高浓度AFB1干预细胞株可能并不合适探讨ADAMTS18基因表达量对TP53基因第249位密码子突变的影响。目前课题组正在进行低剂量AFB1慢性及HBV单、双暴露来探索ADAMTS18基因表达量对TP53基因第249位密码子突变的影响。.本项目的意义在于利用广西AFB1与HBV高暴露的特殊环境背景探索与环境致癌物暴露相关的肝癌遗传易感性，有助于针对肝癌高发地区高危人群开发积极的一级和二级预防策略，对探讨肿瘤发病中的环境－基因相互作用机制具有普遍性意义。