T细胞自噬在口腔扁平苔藓中的作用及其调控机制的研究

Oral lichen planus (OLP) is a T cell-mediated autoimmune disease. Autophagy plays a key role in antigen processing for major histocompatibility complex (MHC) presentation, T cell immune response, cytokine production and keratinocyte inflammatory responses. Based on previous studies, it is hypothesized that altered autophagy in T cell might involved in OLP, through affecting the function of T cell and biological characteristics of keratinocyte. The following aspects will be conducted in the study.(1) To detect Atgs in T cell of OLP using cDNA microarrays, validate the altered expression of selected genes at mRNA and protein level, and to analyze the clinical significance. (2) To build an autophagy model in T cell of OLP. (3) To silence the altered Atgs via siRNA and then examine their effects on T cell activation, proliferation, apoptosis, migration and cytokine secretion. (4) To assay the role of autophagy in crosstalk between T cell and keratinocyte in OLP. (5) To investigate the regulation pathways of autophagy in T cell of OLP, employing inhibitors targeting different pathways. (6) To test the regulatory mechanism of miRNAs on autophagy in T cell of OLP at post-transcriptional level. The present study potentially provides new insights into the pathogenesis of OLP and promising diagnosis and treatment options for OLP, which not only has important practical value, but also has high theoretical significance.

自噬对MHC抗原的提呈、T细胞的免疫应答、细胞因子的分泌及角质形成细胞的炎症反应具有重要的调控作用。在原有研究基础上，本课题提出口腔扁平苔藓（OLP）中T细胞自噬的异常表达影响其活化、分化、增殖、凋亡等过程，导致T细胞的功能异常及角质形成细胞生物学特性的改变，从而影响了OLP的发生发展的新假设。（1）检测OLP T细胞自噬相关基因的差异表达谱，在mRNA和蛋白水平上进行验证，分析其临床意义。（2）建立OLP T细胞自噬模型。(3) 沉默自噬模型中T细胞上的差异自噬相关基因，观察OLP T细胞的生物学特性和功能。（4）建立细胞交互作用立体模型，研究自噬在OLP T细胞和角质形成细胞交互对话中的作用。（5）探讨OLP T细胞自噬的调节通路。（6）在转录后水平上分析自噬相关性miRNA对OLP T细胞自噬的调节机制。本课题对揭示OLP的免疫发病机制、探索诊治新思路，具有重要的理论意义和应用价值。

口腔扁平苔藓（oral lichen planus, OLP）是一种常见的由T细胞介导的免疫炎性疾病。细胞自噬作为重要的溶酶体降解通路，可影响T细胞增殖、活化、死亡及T细胞介导的免疫应答。本项目旨在研究T细胞自噬在OLP中的作用及调控机制。.主要研究内容包括（1）通过Autophagy Array检测OLP患者外周血T细胞中差异表达的自噬相关基因，并分析其与OLP临床特点之间的关系。（2）研究OLP中自噬相关蛋白和Akt/mTOR信号通路蛋白的变化规律及其临床意义。（3）研究IGF1对T细胞自噬、增殖、凋亡、活化及炎性因子分泌的作用。（4）探究IGF1介导的PI3K/mTOR-自噬对T细胞生物学功能的影响。（5）构建T细胞-角质形成细胞共培养模型，研究IGF1和PI3K/mTOR通路在T细胞与角质形成细胞交互对话中的作用。.研究结果显示（1）IGF1在OLP患者尤其是女性、中年患者（30-50岁）外周血T细胞中表达增高，而ATG9B在非糜烂型OLP患者中的表达减少。（2）自噬相关蛋白（IGF1、ATG9B、LC3B、ULK1）和Akt/mTOR信号通路相关蛋白（p-Akt、p-mTOR）在OLP组织和病损局部T细胞中表达上调。（3）IGF1能够抑制T细胞自噬及增殖、促进T细胞凋亡、影响T细胞的活化及细胞因子分泌。（4）IGF1拮抗LY-294,002和Rapamycin对自噬的调控作用。Rapamycin激活自噬抑制T细胞增殖，促进T细胞凋亡和细胞活化，LY-294,002抑制自噬对T细胞增殖和活化的调控呈营养底物依赖性。IGF1介导的PI3K/mTOR对T细胞增殖和凋亡的调控作用呈时间依赖，并在一定程度上影响T细胞分泌细胞因子。（5）共培养体系中T细胞受IGF1和PI3K/mTOR干扰自噬后，促进角质形成细胞增殖，影响角质形成细胞凋亡和细胞因子分泌。.本研究提示OLP外周血和局部病损组织T细胞中存在自噬异常；自噬相关蛋白可在一定程度上评估OLP的疾病严重程度；IGF1及其参与的PI3K/mTOR通路调控的自噬异常在T细胞-T细胞、T细胞-角质形成细胞对话中发挥了一定的作用。因此IGF1可能通过调控T细胞自噬，从而在OLP炎症微环境中发挥免疫调节作用。本研究揭示了T细胞自噬在OLP免疫发病机制和诊疗新靶点中的重要理论意义和应用价值。