口腔扁平苔藓病变上皮基底细胞损伤与细胞增殖关系的研究

o.Oral lichen planus(OLP) is one of most common diseases of oral mucous membrane. Although a lot of study on its immunological pathogenesis, cell proliferation and cell apoptosis have been done and great progress has been achieved, the basal cell damage and it's relationship to OLP's histopathology and disease progress remains unclear. This topic also correlates with the controversy on lichen planus as a potentially malignant disorder. This project will investigate the basal cell damage of OLP at different step of the disease progress by histopathologic, histochemistry, immunohistochemistry, in-situ hybridization and LOH analysis of some cancer suppressor genes. Basal cell damage will be reflected by the expresson of basal cell marker CK5,CK14, CK19, p63 and basement membrane proteins type IV collagen, laminin 332 andα6β4 integrin. Melanoma-associated chondroitin sulphate proteoglycan(MCSP)、CK15、β1integrin and connexin-43 will be used as stem cell markers of OLP epithelia. The expression of Ki67,CDK2,CDK4,CDK6, cyclin dependent kinase inhibitors p16,p21 and p27 will be used as cell proliferation indexes. Cell apoptosis will be studied by bcl-2, bax, caspase-3 immunohistochemistry and TUNEL analysis. LOH of cancer suppressor genes on 3p14.2, 9p21, and 17p13 focus will investigated by RT-PCR. Finally, the basal cell damage will be correlated with cell proliferation, cell apoptosis and the state of LOH of the cancer suppressor genes. Cell proliferation in OLP will also associated to the LOH of the cancer suppressor genes. Through these studies, the mechanism of pathologic changes of the epithelia and epithelial maintenance at the basal cell damage level will be clarified. The research results will also provide some insight to the nature of OLP as one of potentially malignant disorders.

虽然目前对口腔扁平苔藓（OLP）的研究已经相当深入，但关于OLP病变基底细胞损伤状况与病变进展的关系仍不明确，这个问题又直接与目前OLP是否为口腔潜在恶性病变的争论相关。本项目拟采用组织病理学、组织化学、免疫组织化学和分子生物学技术研究不同阶段OLP的基底细胞损伤情况，用多种基底细胞标志物（包括干细胞标志物）表达、基底膜蛋白表达的改变反映基底细胞损伤，探讨基底细胞损伤与OLP病变的细胞增殖（细胞增殖及其相关调控因子）、遗传学改变（包括主要抑癌基因的LOH及微卫星不稳定性）的关系。明确OLP组织病理学的基底细胞液化变性、上皮增生或萎缩的发生机制；基底细胞不同程度损伤状态下病变上皮组织得以维持的机制以及细胞增殖变化下的遗传学变化的背景，为确定OLP是否为潜在恶性病变提供参考。

关于口腔扁平苔藓（OLP）的癌变潜能目前仍有很大争论，其中研究病例纳入标准不统一导致的结果偏差是主要原因之一。本项目严格采用修订的WHO关于OLP的诊断标准，对110例OLP病变的细胞增殖及其调控的改变与基底细胞损伤（基底细胞角蛋白的表达、基底膜相关蛋白的合成）的关系进行细致观察，并且与公认的口腔潜在恶性病变口腔白斑（伴或不伴上皮异常增生）进行对照，以探讨OLP的潜在恶性病变性质。. 研究的主要结果显示，OLP的平均细胞增殖指数Ki67为7.58±3.784%，而在正常口腔上皮为10.00±5.089%，口腔白斑为17.86±9.395%，其差异具有统计学意义。细胞增殖负向调控因子p16在大部分OLP病变上皮中呈现明显阳性表达（83.2%）,而OLK仅少数病例呈现p16阳性表达 (6.7%);正常口腔上皮中均呈阴性表达。同时细胞周期正向调控因子CDK4与p16表达呈负相关,在OLP病变上皮中下调,而在OLK中表达上调。这与TUNEL凋亡实验显示的部分病例中OLP细胞凋亡增加的结果相符。. 正常口腔黏膜上皮基底层细胞表达CK19，在OLP病变上皮基底细胞表达明显减弱甚至不表达，典型病变表达明显弱于早期病变（p<0.05）。在上皮单纯增生和异常增生的白斑中CK19表达减弱，且阳性病例中表达特点不一致，部分病例为基底细胞连续弱表达，部分病例CK19表达明显增强，且向上皮浅层多层细胞表达。在22例正常口腔上皮，110例OLP，30例OLK中，β4整合素在上皮基底和（或）副基底层细胞表达，高表达率分别为73.7%、7.5%和80.0%，典型病变和早期病变的高表达率分别为0.0%和16.0%。. 与正常口腔粘膜上皮相比较,干细胞标志物Bcl-2在OLP表达普遍下调(阳性率2.8%)，而在部分OLK中表达明显上调(13.3%)。LOH结果初步分析显示，OLP和正常口腔上皮中主要抑癌基因的LOH明显低于口腔白斑组. 上述结果提示，OLP病变发展过程中细胞增殖受到抑制，基底膜蛋白β4整合素及基底细胞角蛋白19表达下调，干细胞数量减少，主要抑癌基因的LOH与正常上皮相似。这些特点均与口腔白斑不同，提示OLP基本上属于口腔黏膜良性病变，恶变潜能很低。