基于细胞自噬研究明目地黄丸及其主药对萎缩性黄斑变性的干预机制

Immune inflammatory of retinal pigment epithelial cells (RPE) by oxidative damagecan lead to cell apoptosis is an an important mechanism of early age-related macular degeneration (AMD) , autophagy may play an important role in the pathogenesis of atrophic AMD. Our previous experimental studies and literature research shows that derived from the Liuwei Dihuang Pill and its decoction the Mingmu Dihuang pill has a therapeutic effect on early atrophic AMD, but lack of research on its mechanism. On the basis of previous studies, we propose the theory hypothesis that Chinese medicine may be through the intervention of autophagy cells to prevent the apoptosis of RPE cells.. This study ueing animal experiments and in vitro study of Mingmu Dihuang pills and the three ingredients of main water extracts (Chinese wolfberry, radix rehmanniae, Radix Paeoniae Alba) on oxidative damage in RPE cells, cell apoptosis and autophagy, evaluation and three kinds of main mingmudihuang pill water extracts have intervention effect on the change of autophagy after oxidative damage in RPE cells the completion of this project. The innovative research of autophagy into TCM treatment of atrophic AMD research field, focusing on the mechanism of Chinese medicine on RPE cell injury, and provide a new theoretical basis for Chinese medicine treatment of AMD.

氧化损伤诱导视网膜色素上皮细胞（RPE）产生免疫炎症反应进而引发细胞凋亡是早期年龄相关性黄斑变性（AMD）的重要发病机制，自噬可能在萎缩性AMD发病过程中发挥着重要作用。我们此前的实验研究以及文献研究显示六味地黄丸及其加味衍生出的明目地黄丸对早期萎缩性AMD具有治疗作用，但缺乏对其作用机制的研究。在前期研究的基础上，我们提出中药可能是通过干预细胞自噬从而抑制RPE细胞凋亡，保护RPE细胞的理论假说。. 本研究拟通过动物实验及体外实验观察明目地黄丸及其三味主药水提液（枸杞、熟地、白芍）对RPE细胞氧化损伤、细胞凋亡与自噬的影响，评估明目地黄丸及其三味主药水提液是否对RPE细胞氧化损伤后细胞自噬改变具有干预作用。本课题的完成创新性的把细胞自噬研究引入中医药治疗萎缩性AMD研究领域并进行动态观察，重点探讨中药对RPE细胞损伤保护的机制，为中药治疗AMD提供新的理论依据。

AMD是导致全球老年人失明的主要原因。萎缩性 AMD 的特征是早期黄斑色素沉着和玻璃疣的变化以及晚期地图样萎缩。正常的自噬是细胞自我保护以及维持稳态的一个重要途径，当自噬被阻断时，可加剧氧化应激损伤，导致萎缩性AMD的发展。枸杞子、熟地黄和白芍是明目地黄丸的主药，在萎缩性AMD治疗中应用较多。因此，我们首先通过结合网络药理学和体外实验验证，枸杞子、熟地黄和白芍通过增加Nrf2、HO-1和NQO1的表达，减少RPE细胞凋亡，显着抑制氧化应激，从而发挥其治疗萎缩性AMD的作用。 明目地黄丸功用是滋肾养肝明目，常用于治疗萎缩性AMD，但其分子机制尚不清楚。进一步通过体外和体内实验研究明目地黄丸是否通过激活自噬来缓解碘酸钠诱导的RPE细胞氧化损伤。实验结果表明，碘酸钠抑制RPE细胞活性并诱导细胞凋亡。明目地黄丸增加RPE细胞活性和抗氧化酶活性，降低细胞内ROS水平。自噬抑制剂或SQSTM1 siRNA预处理RPE细胞后，影响明目地黄丸促进Keap1自噬性降解和抗氧化损伤的能力。此外，我们发现明目地黄丸可以增强AMPK磷酸化和SQSTM1的表达，从而促进Keap1的自噬性降解，增加Nrf2核移位，并诱导下游抗氧化因子HO-1和NQO1的表达。综上所述，明目地黄丸通过激活 AMPK/SQSTM1/Keap1通路缓解RPE细胞氧化损伤以发挥保护作用。此研究有助于展示明目地黄丸治疗萎缩性AMD的特点和优势，为明目地黄丸在萎缩性AMD治疗中的国际推广奠定了一定的研究基础，具有重要的学术和临床意义。