应用siRNA技术结合基因置换和超表达探讨猪selX基因生物学功能的研究

目前在人和哺乳动物中已发现25种硒蛋白，但大部分功能仍不清楚，其中包括SelX。研究发现selX在猪肝脏和肾脏中具有较高的表达丰度，预示着肝细胞或肾细胞是研究selX功能的理想材料。本研究拟采用siRNA 结合基因置换和超表达技术，以猪肝或肾细胞为材料，探索selX的生物学功能。首先应用RACE等技术手段分离猪和鼠selX 基因全序列，在此基础上根据猪selX基因3-UTR区序列利用软件设计3-4套小分子siRNA,构建相应干扰载体，转入猪肝或肾细胞，筛选高效率siRNA并考察 selX沉默对细胞生理生化分子学影响；构建相应猪和鼠selX细胞表达载体，转入基因沉默细胞表达，研究细胞重新获得同源或异源selX 基因表达对细胞功能的恢复或影响；在正常细胞中转入猪和鼠selX进行超表达，考察基因超表达对细胞功能的影响。研究结果将有助于从细胞及分子水平认识硒蛋白X可能的生物学功能。