高甘油三酯血症相关性急性胰腺炎中游离脂肪酸对JAK2/STAT3通路的影响

Cytokines provocated by free fat acid (FFA) play an important role in pathogenesis of hypertriglyceridemia induced acut pancreatitis(HTGP).As an important cytokine signal condution pathway, Januskinase/ Signal transducers and activators of transcription(Jak/Stat) expressed in pancreatic acinar cells and regulated cytokines and lipometabolism. Our preliminary experiment proved an enhanced expression of phosphorylated jak2 and stat3 in pancreatic acinar cells administrated with FFA.The activation effect of jak2/stat3 pathway by FFA was depressed remarkably by the jak2 inhibitor AG490.This project intends to research the impact of FFA on the expression of phosphorylated jak2, phosphorylated stat3, TNF-a, IL-6, cellular defect, apoptosis,tissue pathology and lipometabolism in HTGP from cell and animal levels.Impact of FFA on jak2/stat3 pathway are also explored when AG490 and siRNA gene silencing technology are applied preliminarily.Finally, correlated factors in jak2/sta3 pathway are measured in HTGP patients. We will clarify a new theory that FFA induces HTGP by activation of jak2/stat3 pathway and succedent release of cytokines, accelerated lipogenesis, gross apoptosis and deteriorative pathological lesion.

高甘油三酯血症相关性急性胰腺炎（HTGP）中游离脂肪酸（FFA）诱导的细胞因子释放起关键作用。JAK/STAT途径在胰腺细胞内存在表达，对脂肪代谢和细胞因子有调节作用。我们预实验发现，胰腺腺泡细胞在亚油酸作用下p-JAK2、p-STAT3表达增强，给予JAK2抑制剂AG490可逆转亚油酸对JAK2/STAT3通路的激活效应。本课题拟从细胞和动物水平探讨HTGP中FFA对JAK2/STAT3通路中p-JAK2、p-STAT3、TNF-a 、IL-6表达；细胞损害和凋亡；组织病理改变及脂质代谢的影响。通过AG490及siRNA基因沉默抑制JAK2/STAT3通路后相关指标的改变。最后检测HTGP患者血清中JAK2/STAT3途径中相关因子表达。阐明"FFA-JAK2/STAT3通路激活-细胞因子释放+脂肪加速形成-细胞凋亡+胰腺组织病理损害-HTGP"致病途径，为HTGP发病机制提供新思路。

在我国，随着生活水平提高及饮食结构的改变，与之相关的高甘油三酯血症相关性急性胰腺炎（HTGP）发病率日益增加。本课题从细胞、动物以及临床水平探讨JAK2/STAT3通路在HTGP发生发展中的机制，并通过JAK2抑制剂AG490及siRNA基因沉默抑制JAK2/STAT3通路后探索相关指标的改变。.在细胞水平上，MTT法证实亚油酸（LA）浓度依赖性地抑制大鼠胰腺外分泌细胞（AR42J细胞）的增殖，LDH释放试验证实LA浓度依赖性地诱导细胞毒性的产生。选用0.4mM作为LA高甘油三酯的最佳浓度，作用于AR42J细胞，JAK2/STAT3通路相关蛋白（p-JAK2、p-STAT3）表达升高，同时该通路下游炎性因子（IL-6、TNF-α）和脂肪代谢相关因子，如脂肪酸合成酶（FAS）表达也升高，该作用可被AG490所逆转；使用STAT3-siRNA基因沉默，LA作用下细胞p-JAK2表达升高，而p-STAT3，STAT3和FAS的表达量下降。细胞实验中我们得出在小鼠胰腺外分泌细胞中，高剂量的LA激活了JAK2/STAT3信号通路，同时使下游的炎症因子（IL-6、TNF-α）和脂肪代谢相关因子（FAS）升高，该作用可被AG490及STAT3siRAN部分逆转。.在动物水平上，采用蛙皮素腹腔注射两次（100ug/kg/次）建立大鼠急性胰腺炎（AP）模型，高脂饮食结合蛙皮素腹腔注射成功建立HTGP大鼠模型。研究发现正常饮食AP和HTGP大鼠胰腺组织中JAK2/STAT3通路中相关蛋白（JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3）表达增高，相关炎性因子（IL-6、TNF-α）分泌增加。与正常饮食大鼠AP相比，HTGP相关指标改变更为显著。预先使用AG490，正常饮食AP大鼠胰腺组织破坏和炎症反应减弱，相关炎症因子表达降低，而HTGP大鼠胰腺组织破坏和炎症反应反而加重，炎性因子表达升高。可以得出，高脂饮食会导致JAK2/STAT3通路激活的增加以及胰腺组织炎症加重，但AG490并不能有效阻断HTGP大鼠JAK2/STAT3通路的激活。.同时，本课题收集人AP血清标本进行研究，证实AP患者血清中JAK2/STAT3通路相关因子【游离脂肪酸（FFA）、IL-6、leptin、p-JAK2、p-STAT3】表达升高，且p-STAT3的水平与FFA和p-JAK2的水平独立相关。