HMGB1在Flt3L联合Rapamycin诱导移植免疫耐受的特征与机制

This project will define the features and mechanisms of HMGB1 in transplant tolerance model induced by Flt3L combined with rapamycin, which was established in previous research work, answer the following scientific questions:(1) What are influences to HMGB1 of allograft (including release ways,relevant receptors and cellular locations) by Flt3L combined with rapamycin? (2) What are the biochemical features (i.e. redox) of HMGB1 released by allograft in long survived recipients? (3) What are the differences of HMGB1 released by tolerant DC and regulatory T cells compared to normal DC and effective T cells? (4) If or not promoting transplant tolerance by interventing the release and biochemical status of HMGB1? This project has an important significance of elucidating the molecular features of HMGB1 as well as the roles of HMGB1 in transplant tolerance, also providing new options to prevent transplant rejection.

本项目拟明确前期研究工作采用Flt3L联合rapamycin诱导的移植耐受中HMGB1的特征与机制，回答以下科学问题：（1）采用体内FLT3L联合短期应用低剂量（2 mg/kg/day,15天）Rapamycin对移植物释放HMGB1的影响（包括HMGB1的分泌方式、HMGB1相关受体以及在细胞内的定位等）？（2）FLT3L联合短期低剂量应用Rapamycin诱导移植物耐受，长期存活受者小鼠HMGB1的生化状态（氧化/还原）怎样？（3）耐受性DC与调节性 T细胞释放HMGB1以及对HMGB1的反应与常规DC和效应T细胞有何不同？（4）干预HMGB1的释放与生化状态能否促进耐受？该项目对阐明HMGB1的分子特征以及在移植耐受中的作用具有重要理论意义，也为防治移植排斥反应提供新策略。

该项目主要研究前期研究所建立的移植耐受模型[Flt3L联合低剂量（2 mg/kg/day）短期（15 days）应用Rapamycin诱导同种心脏移植耐受中HMGB1的产生与功能特征。我们的初步研究发现：（1）在接受腹腔心脏移植手术第七天，与正常小鼠相比，受鼠血清中IL-6和IFN-γ明显增加，而联合应用雷帕霉素和Flt3L可降低血清中IL-6和IFN-γ含量,而联合用药组小鼠血清HMGB1含量高于PBS对照组; (2) 术后第七天，提取移植物组织总蛋白进行HMGB1检测，结果显示，联合用药组和雷帕霉素组心脏移植物中HMGB1含量明显增高；（3）雷帕霉素可促进小鼠巨噬细胞HMGB1的表达，但应用自噬阻断剂3-MA并不能减少HMGB1的含量;（4）检测并比较了各组（Flt3L+Rapa; Flt3L; Rapa; PBS; Syngenic control） 受者小鼠在心脏移植后7天脾脏树突状细胞（DCs），B细胞和巨噬细胞表面TLR-2,TLR4及RAGE的表达水平，结果表明：各组移植器官受者小鼠的脾脏树突状细胞（DCs），B细胞和巨噬细胞表面TLR-2,TLR4及RAGE的表达水平无统计学差异；（5） 采用细胞浆内染流式细胞术检测并比较了各组（Flt3L+Rapa; Flt3L; Rapa; PBS; Syngenic control）在心脏移植后7天受者 小鼠脾脏树突状细胞（DCs），B细胞和巨噬细胞胞浆HMGB1的含量，结果表明：各组移植器官受者小鼠的脾脏树突状细胞（DCs），B细胞和巨噬细胞胞浆HMGB1的含量无统计学差异；（6）. 检测并比较了各组（Flt3L+Rapa; Flt3L; Rapa; PBS; Syngenic control）在心脏移植后7天受者 小鼠心脏移植后血清细胞因子水平。我们发现：与其它组受者小鼠相比较，联合用药处理组（Flt3L+Rapa）受者小鼠血清中IL-10和IL-4水平显著升高。