调节T细胞及亚群在肾移植联合供者造血干细胞移植诱导免疫耐受中作用的研究

器官移植受者由于终身服用免疫抑制剂，导致感染、恶性肿瘤等多种严重副作用,影响患者的长期存活，并消耗了大量的医疗资源。课题组在食蟹猴诱导免疫耐受实验基础上，2009年4月开始,通过全淋巴照射等多种预处理方案,清除受者效应淋巴细胞，已顺利实施了7例肾移植联合供者造血干细胞移植，混淋实验证实部分患者存在供者特异性免疫低反应,不同患者存在不同程度和持续时间的嵌合现像，而进一步的研究发现在这些受者中存在调节性T细胞及其亚型的特征性变化，如活化型Treg等显著增加，这些变化在免疫耐受诱导中在作用有待深入研究。首例患者已顺利减药并保持肾功能稳定。本课题在前期工作基础上，进一步探索Treg在肾移植免疫耐受诱导中的变化，重点探讨不同细胞亚群的消长变化与移植肾功能状态及全身免疫变化之间的规律。为确立受者停药标准，进一步探讨临床免疫耐的可行性提供依据。

课题组在食蟹猴诱导免疫耐受实验基础上，2009年4月开始,通过全淋巴照射等多种预处理方案,清除受者效应淋巴细胞，已顺利实施了13例肾移植联合供者造血干细胞移植，中位随访时间为 33 个月，2 例患者已完全停用免疫抑制剂，另 11 例平均用药量也已逐步减至常规剂量的 1/2。混淋实验证实部分患者存在供者特异性免疫低反应,受者骨髓及外周血供受者基因嵌合率高达30-50%，部分持续 2 个月以上；而进一步的研究发现在这些受者中存在调节性T细胞及其亚型的特征性变化，如活化型Treg等显著增加。免疫抑制剂用量减少的同时也明显减少了感染风险，所有患者无一人因感染入院。本课题还发现西罗莫司在肾移植中通过部分增加调节性T细胞的比例发挥免疫调节作用。对CD4_CD25hiFoxP3+调节性T细胞（Treg细胞）和新定义的Foxp3+ T细胞亚群，其中包括CD45RA_FoxP3lo分泌细胞因子的T细胞（CST细胞），CD45RA_FoxP3hi激活的T细胞（aTregs），和CD45RA_FoxP3_静息Treg（rTregs），与环孢素相比，西罗莫司显着提高Tregs比例和两个CD45RA阴性亚群，包括CST细胞和aTregs。然而，这rTregs影响不显著。然而，促炎症和抗炎的foxp3_T细胞亚群增加也表明西罗莫司在免疫调节抑制影响上存在潜在损害。我们应用了临床信息学、蛋白谱学、生物信息学的技术，检测了移植前、移植后1周和1月的蛋白谱表达，分析了它们信号转导网络的差异，发现了一系列在排斥时具有的特异性改变。我们同时发现，DZNep延迟在供体的同种异体反应性CD8 + T细胞的体内增殖，并且由这些T细胞产生白细胞介素-2减少。此外，DZNep治疗导致interferon，肿瘤坏死因子，颗粒酶B，TRAIL，和Fas配体表达的供体CD8 + T细胞显著降低，提示在体内的T细胞的存活和多级调制作用的影响。值得注意的是，DZNep治疗不影响受者造血嵌合体产生。这些研究结果表明，通过DZNep调控组蛋白的甲基化水平，实现造血嵌合体诱导供体特异性器官移植免疫耐受的供体allo-HSCT联合实体器官移植可能是一个潜在的战略。上述结果对研究肾移植免疫耐受的分子机理、提高移植患者长期生存率具有重要意义，为个体优化治疗开创新的途径，为减少或避免肾移植后长期应用免疫抑制剂奠定了理论基础。