新型调节因子NIPSNAP3A对p63功能的调控及其分子机制研究

p63是p53家族新成员，与p53有非常相似的结构，能结合p53靶基因。研究显示p63功能与p53即相似又有区别，在肿瘤发生发展中的作用较p53更加复杂。p63发挥作用受到与其相互作用的共调节因子调节。我们以p63分子C端特异基序为诱饵，利用双杂交技术获得其相互作用蛋白NIPSNAP3A。实验表明，NIPSNAP3A特异与p63结合，不与p53结合，并抑制p63介导的下游基因p21转录，在电离照射后NIPSNAP3A转录减少，p21转录增强。 这些实验显示NIPSNAP3A可能是p63特异性共调节因子。本项目拟对以下内容深入研究：1)p63与NIPSNAP3A相互作用特性；2)NIPSNAP3A调节p63转录及其分子机制；3)NIPSNAP3A对p63介导的肿瘤细胞生物学特性影响。本项目完成对阐明p63的调控机制、加深对整个p53家族的了解以及对肿瘤基因治疗和抗肿瘤药物的开发具有重要意义。

p63是p53家族的新成员，与p53有非常相似的结构，能结合p53靶基因。研究显示p63的功能与p53即相似又有区别，在肿瘤发生发展中的作用较p53更加复杂。p63发挥作用受到与其相互作用的共调节因子调节。我们以p63分子的特异基序SAM区和TID区为诱饵，利用酵母双杂交技术获得一个p63的新型相互作用蛋白NIPSNAP3A。免疫共沉淀和GST pull-down实验表明，NIPSNAP3A特异的与TAp63结合，不与p53、△Np63结合。确定了NIPSNAP3A的1-144aa区域和TAp63的TA domain在相互作用中起着重要作用。利用荧光共聚焦实验确定了GFP-NIPSNAP3A与Red-TAp63共定位于细胞核内。利用蛋白稳定性实验确证NIPSNAP3A通过溶酶体自噬的大自噬途径降解△Np63。利用细胞生物学实验确证NIPSNAP3A通过自噬途径抑制细胞增殖。本项目深入研究p63特异的相互作用蛋白NIPSNAP3A生物学功能及其调控转录机制，阐明了p63的一条新的降解途径，这对整个p53家族的了解以及对肿瘤的基因治疗和抗肿瘤药物的开发具有重要的意义。