血管生成素样蛋白3导致足细胞骨架重排参与蛋白尿发生的分子机制

足细胞足突融合是大多数蛋白尿疾病共同的病理表现，骨架蛋白重排是足突融合的分子基础。最近研究证实足细胞表面存在的整合素αVβ3活化后可致足细胞活动力升高引起足突融合参与大量蛋白尿发生,但其活化的分子机制仍不清楚。近期我们对血管生成素家族新成员- - 血管生成素样蛋白3(ANGPTL3)的研究证实,ANGPTL3不仅能够活化肾小球内皮细胞的整合素αVβ3,且在肾脏足细胞存在特异性表达,其表达量与蛋白尿程度呈正相关。本课题拟在明确ANGPTL3与整合素αVβ3在足细胞中的亚细胞分布和共定位关系的基础上,探讨足细胞分泌ANGPTL3后能否活化自身整合素αVβ3从而导致骨架重排的作用特点,深入研究ANGPTL3对足细胞整合素β3亚基下游骨架调控相关信号分子的活化机制，以揭示足细胞分泌ANGPTL3后可活化自身整合素αVβ3及其下游信号分子促发细胞骨架重排、足细胞活动力升高、足突融合参与蛋白尿发生的新机制

肾小球性蛋白尿的病理机制与治疗仍是研究者面临的挑战，其中认为足细胞足突融合是大多数蛋白尿疾病共同的病理表现，而足细胞骨架蛋白重排是足突融合的分子基础。血管紧张素样蛋白3（ANGPTL3）目前已被证实参与了肾小球性蛋白尿的病理过程，尤其与足细胞损伤密切相关。Angpl3的受体为整合素αVβ3，而足细胞能够表达整合素αVβ3，且足细胞表达的整合素αVβ3活化可导致足细胞损伤。通过本课题研究明确了正常情况下ANGPTL3在足细胞胞浆中发布，而当发生大量蛋白尿的病理后ANGPTL3主要分布在足细胞足突；激光共聚焦技术显示ANGPTL3与整合素β3存在足细胞上存在共定位关系；通过免疫共沉淀实验证实ANGPTL3与整合素αVβ3能够直接结合，表明了整合素αVβ3是ANGPTL3在足细胞上的受体；通过ANGPTL3-cDNA转染、miRNA干扰及阿霉素刺激足细胞的实验证实了ANGPTL3是调控整合素β3活化的关键的分子；足细胞ANGPTL3表达分、泌增加后使足细胞的α-actin4表达发生改变，导致足细胞骨架重排，从而证实了足细胞中ANGPTL3通过活化整合素β3参与了足细胞骨架重排；划痕实验表明足细胞ANGPTL3表达增加后会促使足细胞活动性增加，而在miRNA干扰后足细胞ANGPTL3表达降低，即使受到阿霉素刺击，足细胞仍能保持较低的活动性，通过本实验表明ANGPTL3在足细胞中的表达升高能够增加足细胞的活动性，进而导致了足细胞损伤；Western-blot实验表明ANGPTL3表达增加使足细胞中FAK、RhoA磷酸化增加，而PI3K的抑制剂LY294002能够抑制RhoA磷酸化；而通过阻止整合素β3，亦能够阻止ANGPTL3高表达介导的FAK、RhoA磷酸化，表明足细胞中ANGPTL3表达、分泌增加后，使整合素αVβ3活化增加，导致其胞内的下游分子FAK、PI3K、RhoA磷酸化增加，进而引起足细胞骨架重排，足细胞结构紊乱，促进了足细胞损伤，进一步明确了其胞内FAK/PI3K/RhoA的信号通路。通过该课题研究，明确了足细胞中Angptl3在不同状态下的表达变化及其变化与足细胞损伤的关系，进一步阐明了Angptl3参与介导足细胞损伤的信号通路。