血管生成素样蛋白3参与肾小球足细胞失黏附损伤的机制研究

足细胞损伤后可分泌细胞因子影响足细胞与GBM的黏附稳定。足细胞在GBM上粘附稳定性的改变，破坏了GBM分子网络的稳态，并激活细胞内信号通路介导足细胞骨架改变。前期研究发现血管生成素样蛋白3(ANGPTL3)在阿霉素肾病大鼠及肾病综合征患者肾组织足细胞上表达；体外实验中ANGPTL3基因转染能够影响嘌呤霉素诱导足细胞失黏附损伤。本研究以体外嘌呤霉素诱导足细胞损伤为实验平台，研究足细胞内源性ANGPTL3表达水平与足细胞黏附状态、足细胞细胞骨架改变及足细胞内钙离子流变化的相关性。进一步分析ANGPTL3基因转染对嘌呤霉素诱导足细胞失黏附损伤的影响及其分子机制。通过ANGPTL3-FLD突变质粒的构建，设计不同蛋白聚糖分子铺被的条件及免疫共沉淀实验，探索ANGPTL3与HSPG、dystroglycan可能的相互作用及分子机制。为肾小球固有细胞的保护及降低蛋白尿开辟新的思路。

足细胞损伤后可分泌细胞因子影响足细胞与GBM的黏附稳定。足细胞在GBM上粘附稳定性的改变，破坏了GBM分子网络的稳态，并激活细胞内信号通路介导足细胞骨架改变。(1)本研究以嘌呤霉素诱导足细胞损伤为实验平台，研究足细胞内源性ANGPTL3表达水平与足细胞黏附状态、足细胞细胞骨架改变相关性。发现嘌呤霉素处理足细胞后能够导致足细胞发生骨架纤维的排列紊乱和骨架蛋白 F-actin、骨架调控蛋白α-actinin-4的表达下降，进而引起足细胞活动力升高，迁移能力增强。实ANGPTL3是病理状态下足细胞骨架重排发生的关键环节之一。(2)从基因转染足细胞的探索到外源性重组ANGPTL3蛋白对足细胞不同时相干预的研究，探索了ANGPTL3对嘌呤霉素诱导足细胞失黏附损伤的影响及其分子机制。发现外源性ANGPTL3可以引起足细胞F-actin重排；其分子机制与Rac1和RhoA的激活，特别是Rac1的激活有关；并通过整合素αVβ3-FAK-PI3K-Rac1的信号传递途径，促进了足细胞板状伪足的生成。(3) 通过运用ANGPTL3不同结构域的重组蛋白干预体外培养的足细胞实验研究，探索了ANGPTL3对足细胞肌动蛋白纤维重排及足细胞失黏附的影响。证实ANGPTL3-FLD片段是引起足细胞F-actin重排的关键结构域，CCD片段不参与ANGPTL3对足细胞F-actin重排的影响；FLD和CCD片段都参与了嘌呤霉素对足细胞失黏附损伤的影响，两者作用效果有所不同，FLD片段起主导作用，CCD片段也可对足细胞产生影响，其受体和具体途径目前尚不明确。