HUWE1 在卵巢癌发生发展中的作用

Huwe1是一种含Hect结构域的E3泛素化连接酶，调节底物蛋白降解，已知底物有N-myc、C-Myc、Mcl-1、p53、CDC6等。由于底物蛋白包括多种癌基因和抑癌基因，加之Huwe1在多种癌症组织中高表达而又发生基因变异，因此自2005年发现Huwe1基因全长以来对Huwe1在癌症中的作用一直存在很大争议，至今无确凿证据予以澄清。癌症基因组数据库中数据表明Huwe1在卵巢癌标本中基因突变率达100%（8/8），本项目将对Huwe1在卵巢癌组织中的表达和基因突变进行分析；并建立可二次开闭Huwe1基因功能的遗传工程小鼠和新型小鼠卵巢癌模型，分析Huwe1基因灭活及恢复对卵巢癌发生发展各阶段的影响；研究Huwe1对卵巢癌干细胞的影响以及分析Huwe1作用的分子机制。研究结果将澄清Huwe1在癌症中的作用、及其影响卵巢癌的分子机制，和Huwe1是否可作为治疗靶点等问题具有重要意义。

卵巢癌死亡率在各类妇科癌症中居于首位，对女性生命健康造成严重的威胁，如何有效地治疗卵巢癌仍然是科研工作者亟需解决的难题。泛素化是细胞生命活动中重要的调控系统，近年来被证明与恶性肿瘤的发生发展有着密切联系，其中泛素化连接酶作为肿瘤治疗靶点越来越受关注。HUWE1是一种泛素化连接酶，其已知底物多与肿瘤相关，极有可能影响卵巢癌的诊断和治疗。为此，我们从HUWE1条件性敲除小鼠中分离卵巢上皮细胞（mouse ovarian surface epithelium cell, MOSE），并将其进行恶性转化，建立HUWE1卵巢癌研究模型。实验组细胞（MOSE-CRE）直接表达CRE敲除HUWE1;对照组细胞（MOSE-CREER）表达CREER，只能通过他莫昔芬诱导CRE表达进而敲除HUWE1。实验证明，与MOSE-CREER细胞相比，MOSE-CRE细胞增殖和克隆形成能力显著降低。将这两株细胞同时移植到免疫缺陷型小鼠皮下，MOSE-CRE细胞组不能形成肿瘤，而MOSE-CREER细胞组全部形成肿瘤。用他莫昔芬处理成瘤后的MOSE-CREER小鼠，敲除HUWE1,肿瘤体积显著降低。取他莫昔芬处理组与未处理组的肿瘤组织做免疫组化染色分析，发现给药后的肿瘤组织中ck8和ki67染色均为阴性，而caspase-3阳性率显著增加，说明HUWE1敲除后，肿瘤内的卵巢上皮细胞被杀死。以上证据表明HUWE1对于卵巢癌的发生和发展是必需的，其功能调节可能是卵巢癌潜在的治疗靶标。