人附睾蛋白4（HE4）在卵巢癌发生发展中的作用及其机制研究

HE4是一个新的卵巢癌标志物，特异性优于CA125，但功能和机制目前均未见报道。在前期实验中我们已获得一些初步结果，表明HE4参与细胞周期的调节、凋亡、侵袭和转移等过程，在卵巢癌发生发展中可能具有重要意义。本课题拟通过：1）RNA干扰和基因转染等技术下调或上调多种卵巢癌细胞HE4的表达，观察体外卵巢癌细胞和动物体内移植瘤的生物学特性变化；2）制备重组HE4质粒，表达、纯化HE4，并制备中和性单克隆抗体，体内外实验分别观察外源性HE4刺激和被抗体封闭后卵巢癌细胞生物学活性的变化。通过以上2套正反系统的研究，确定HE4相关功能，并进一步通过：3）基因和蛋白芯片以及多种生物学技术，研究与HE4相关的基因和蛋白，并探讨这些基因和蛋白与HE4的相互作用。明确HE4在卵巢癌发生、发展中的作用及其机制。

人附睾蛋白4是近年发现的新的卵巢癌标志物，其所在的20q12-q13.2 基因位点是卵巢癌中最常见的异常扩增区域之一，高度提示该位点基因参与癌的发生发展。.为了揭示HE4 在卵巢癌发生发展过程中的作用及机制，检测了9种卵巢癌细胞株HE4 mRNA和蛋白表达水平，发现不同癌细胞株中的HE4表达水平差异较大。选用HE4相对高表达细胞株CaoV3和SKOV3.ip1细胞用于RNA干扰实验。成功应用HE4 siRNA干扰了CaoV3细胞HE4的表达，并成功地构建了pcDNA6.2 GW/EmGFP-HE4 shRNA载体，稳定转染了SKOV3.ip1细胞并克隆化培养用于后续的功能实验。.采用PI染色法分析，结果表明HE4基因沉默阻滞了CaoV3 细胞和SKOV3.ip1细胞从G0/G1期过渡到S期。为观察HE4基因沉默对细胞增殖能力的影响，用CCK-8法绘制细胞生长曲线，转染HE4 shRNA的干扰组SKOV3.ip1细胞增殖速度明显减慢。采用Transwell迁移和侵袭实验检测了细胞迁移和侵袭能力的变化，结果显示HE4基因沉默后SKOV3.ip1的迁移和侵袭能力下降。.分子机制研究显示HE4过表达降低了p-MEK/MEK、p-ERK/ERK、p-AKT/AKT及p-P38/P38的比值，而p-JUN/JUN 、p-JNK/JNK的比率却显著升高，相反，HE4基因沉默显著增加了p-MEK/MEK、p-ERK/ERK、p-AKT/AKT的比值，p-JNK/JNK、p-P38/P38的比值显著降低。.利用基因芯片技术检测卵巢癌细胞中HE4相关的mRNA/lncRNA，并对差异性mRNA/lncRNA进行表达谱分析，mRNA/lncRNA广泛参与细胞增殖、细胞死亡、免疫调节和生殖功能等生物学行为。构建mRNA与lncRNA共表达网络发现，lncRNA-p13738在整个共表达网络中处于中心地位。.综述所述，本课题结果表明，HE4在不同卵巢癌细胞株中的表达水平有较大差异。HE4参与细胞周期的调控，并促进了卵巢癌的侵袭和转移，JNK/SAPK和p38/MAPK信号转导通路参与了HE4介导的卵巢癌发生过程。lncRNA可能广泛参与卵巢癌细胞的生物学行为。lncRNA-p13738是卵巢癌细胞中HE4相关的关键性lncRNA。mRNA/lncRNA可能通过基因转录和转录后调节调控靶基因。