丹酚酸/丹参酮配伍抗凝血酶损伤内皮细胞的作用及信号转导机制研究

动脉粥样硬化(AS)是缺血性心脑血管疾病共同的病理基础，活血化瘀中药防治AS疗效确切。凝血酶在血栓形成中作用于内皮细胞介导炎症损伤，血栓形成与炎症损伤相互作用是AS早期病理过程。研究证明，丹参组分在这一过程中对内皮细胞有明确的保护作用。但对其保护作用途径、机制尚未明确。本研究①建立人脐静脉内皮细胞凝血酶损伤模型，研究丹酚酸/丹参酮配伍对血栓形成和炎症损伤的作用；②建立人脐静脉内皮细胞和血小板共培养系统，并复制凝血酶损伤模型，研究丹酚酸/丹参酮配伍对凝血酶激活血小板-内皮细胞粘附的作用；③利用特异性抑制剂，研究丹酚酸/丹参酮配伍对凝血酶受体及非受体信号转导通路相关基因PAR1、PAR4、PI3K、JAK、STAT等的作用。试图阐明丹酚酸/丹参酮配伍抗凝血酶损伤的主要分子机制，为探索丹参主要组分防治AS的机理和作用靶点提供科学依据，同时也为中药组分配伍和优化治疗策略提供创新性思路和实验依据。

动脉粥样硬化(AS)是缺血性心脑血管疾病共同的病理基础，活血化瘀中药防治AS疗效确切。凝血酶在血栓形成中作用于内皮细胞介导炎症损伤，血栓形成与炎症损伤相互作用是AS早期病理过程。研究证明，丹参组分在这一过程中对内皮细胞有明确的保护作用，但对其保护作用途径、机制尚未明确。本项目通过建立人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凝血酶损伤模型，研究丹酚酸/丹参酮配伍对血栓形成和炎症损伤的作用及信号转导机制。并以凝血酶为切入点探讨丹酚酸/丹参酮配伍抗AS的途径及机制，为中药组分配伍和优化治疗策略提供创新性思路和实验依据。项目完成情况①凝血酶对HUVEC生长具有双向调节作用，具有量-效和时-效关系：低浓度短时间作用可以促进细胞生长，而长时间作用可损伤细胞；高浓度则可在短时间内损伤细胞，随作用时间延长损伤加重。②50U/ml凝血酶作用6h可以抑制HUVEC细胞活性，增加细胞通透性，促进炎症因子分泌，使血栓形成相关指标物质分泌紊乱，以此模拟AS形成过程中的内皮损伤环节，可成功建立体外HUVEC凝血酶损伤模型。③100µg/L丹酚酸、丹参酮均可减轻凝血酶造成的HUVEC损伤，可在一定范围内剂量依赖性提高细胞活力。丹酚酸/丹参酮配伍后协同增效，降低LDH含量作用加强，对HUVEC损伤的保护作用优于单用，适宜配伍比例为1:1。④丹酚酸和丹参酮及配伍可减低因凝血酶诱导而升高的内皮素-1(ET-1)、白介素-6(IL-6)、血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)、E选择素(E-selectin)、P选择素(P-selectin)含量，并升高因凝血酶损伤而降低的6-酮前列环素(6-K-PG)含量。表明丹参组分及配伍后可分别通过抗炎、抗凝而发挥保护凝血酶损伤内皮作用。⑤丹酚酸/丹参酮配伍可以降低蛋白酶活化受体-1(PAR-1)、酪氨酸蛋白激酶2(JAK2)、磷酸化信号转导子和转录激活子(p-STAT3)的蛋白表达，分别通过PAR凝血酶受体途径和JAK2/STAT3信号转导途径发挥抗凝血酶损伤作用。凝血酶可诱导HUVEC炎症损伤，促进血栓形成，丹酚酸、丹参酮配伍可对抗凝血酶损伤，减少炎症因子、黏附分子等表达，发挥保护内皮细胞作用，其作用机制与抑制凝血酶受体PAR-1及抑制JAK2/STAT3信号转导通路有关。取得成果①发表论文四篇。一篇论文被接收，SCI收录。②培养博士研究生一名、硕士研究生一名。