宣威肺腺癌XWLC-05细胞PI3K/AKT途径活性与放射凋亡、DNA损伤相关性研究

通过放射细胞克隆形成实验、流式细胞检测、western-blot和DNA损伤"彗星"分析法，求出A549和云南宣威肺腺癌XWLC-05母本细胞和Ly294002抑制PI3K后放射生物学参数D0、Dq、N和α/β、SF2值，比较放射增敏性、细胞周期分布及凋亡情况变化；检测两株母本细胞和Ly294002抑制PI3K并放射前后的PI3K/Akt相关下游蛋白及DNA-PKcs、Ku70、Ku80的表达、细胞DNA损伤与修复的量效和时效关系，以深入研究几种情况下两细胞放射敏感性与PI3K/Akt通路活化、DNA损伤与修复及DNA-PKcs的相关性，弄清XWLC-05母本细胞PI3K/Akt通路活化及与DNA放射损伤和修复以及关键酶的特殊性。特别是率先研究PI3K/Akt与Ku70、Ku80的关系，进一步阐明XWLC-05细胞PI3K/Akt通路与DNA-PK的关系和该通路抑制后的放射增敏作用机制。

本项目通过放射细胞克隆形成实验、流式细胞术、western-blot和 “彗星”分析法，研究A549和云南宣威肺腺癌XWLC-05母本细胞和LY294002抑制PI3K后放射杀灭效应，比较放射增敏性、细胞周期分布及凋亡情况变化；并检测分析了PI3K/Akt相关下游蛋白及DNA-PKcs、Ku70、Ku80表达、细胞DNA损伤与修复的量效和时效关系。研究发现加入LY294002抑制剂后，A549和XWLC-05细胞存活分数均降低；同一照射剂量下，XWLC-05细胞存活分数与A549细胞存在差异。LY294002联合照射对两种细胞的G2/M期比例和凋亡率的影响也具有差异。XWLC-05母本细胞中p-AKT 473和p-AKT 308蛋白表达与A549细胞不同，即XWLC-05和A549细胞的PI3K活性具有差异；加药后PI3K活性受抑制的程度也不同。而两种细胞Ku70、Ku80蛋白的表达则在各组间无显著差异； LY294002与放射联合能够抑制DNA-PKcs表达，随着时间的延长抑制作用降低。A549和XWLC-05细胞DNA损伤均呈剂量依赖性增加，两对照组无统计学差异，PI3K抑制组间具有差异；两种细胞DNA损伤也呈时间依赖性降低，加药组DNA损伤程度与对照组不同。研究提示XWLC-05与A549细胞之间存在固有的放射敏感性差异；抑制PI3K/AKT活性能不同程度增加XWLC-05和 A549细胞的放射敏感性，其放射敏感性的差异与该通路活性有关。抑制PI3K/AKT活性可能通过调控细胞周期分布、DNA损伤及修复来影响细胞放射性凋亡，从而影响其放射敏感性。对认识云南宣威高发肺腺癌的生物学行为、放射治疗、放化综合治疗、预后判断等有重要的指导意义。项目研究中发表SCI论文1篇，国内核心期刊论文3篇，发表会议论文6篇；培养硕士研究生5名，出国交流7人次，参加国内会议交流8人次。