兼具靶向显像及溶栓功能的纳米泡对肝动脉血栓的实验研究

肝动脉血栓是肝移植术后最严重的血管并发症，直接影响移植肝的存活，早期诊断、及时治疗对挽救移植肝、提高受体存活率至关重要。本课题拟在前期成功制备的可负载抗癌药物、可进行超声显像及载cRGD肿瘤靶向聚合物纳米囊泡的多个相关研究的基础上，探索以聚合物纳米囊泡为载体制备可携带cRGD并负载尿激酶的纳米级超声造影剂，通过建立肝动脉血栓模型来评价其对肝动脉血栓的超声靶向显像及溶栓效果。与微米级血栓靶向超声造影剂相比，纳米级造影剂在游离状态下回声信号极低，大量聚集靶区后回声明显增强，可获得更高的信噪比；而且其粒径更小，穿透力极强，更易进入血栓内部，获得更多的与靶点结合的机会，对肝动脉附壁血栓的靶向显像及溶栓研究可能更具优势。本课题的研究成功有望为肝移植术后肝动脉血栓提供早期诊断与治疗一体化的特异、无创、快捷、高效的新技术途径，并大大提高移植肝及受体的存活率，具有巨大的社会效益和经济效益。

血栓超微结构显示结构较疏松，为血小板小梁及纤维蛋白网之间网罗大量血细胞；纳米级微泡粒径小、穿透力强，更易进入血栓内部获得与靶点结合的机会，增加在血栓局部的聚集，使用携尿激酶（uPA）纳米级血栓靶向超声造影剂在血栓早期诊断及治疗上可能更具优势。该项目该项目拟在制备一种粒径小、可稳定显像的纳米级超声造影剂，通过对其靶向修饰及携带溶栓药并进行相关实验研究。主要研究结果：（1）共聚物PEG-PDLLA的合成并从理论上证明其对PFOB的良好相容性及潜在包负率为6.60%，制备了负载PFOB 的纳米囊泡及胶束并超声显像对比观察，结果显示纳米囊泡显像优于纳米胶束并进一步优化制备方法。（2）进行了F8C3为核心的纳米级脂质微泡的制备，稀释较高倍数后体内外仍具有良好的超声显像效果，其超声显像明显优于聚合物纳米囊泡，且易产生空化效应，在血栓诊疗一体化及监测治疗效果方面可能更具优势。（3）对比声振法和机械振荡法制备的纳米微泡的优缺点，结果显示：所得微泡大小相近，机械振荡法制备的微泡粒径分布较均一、浓度高、用时短，适合用来进行疾病方面的超声造影的实验研究，为今后NBs的进一步应用研究提供技术指导。(4)功能性纳米级脂质微泡的制备：①以生物素-亲和素为桥梁制备了靶向纳米微泡，体外观察其与靶细胞有良好的结合能力，并通过细胞爬片观察明显增强超声显像效果。②利用静电吸附作用制备搭载uPA阴离子脂质微泡，荧光显微镜下可以观察到FITC标记的uPA成功结合到阴离子微泡表面；载药微泡的表面电位明显低于空白微泡。(5) 基于上述基础，进行携uPA-RGDK纳米微泡的制备及体内外血栓显像及溶栓的初步研究：荧光显微镜下FITC-uPA及红色荧光Rob-RGDK结合到纳米微泡表面，体外实验示多功能微泡明显增强血栓显像效果且具有较好的溶栓效果。制备了大鼠腹主动脉血栓模型，超声显像可见靶向纳米微泡可明显增强血栓显像，而普通微泡显示血栓区域充盈缺损，前者较后者更直观、易观察。体内溶栓实验进一步完善中。